抗生殖支原体单克隆抗体的鉴定及临床应用分析.pdfVIP

英文缩写 Mycoplasma genitaium(Mg)生殖支原体 Mycoplasmapneumoniae(Mp)肺炎支原体 Mycoplasmahyorhinis(Mh)人型支原体 口腔支原体 Mycoplasmaoral(Mo) 猪鼻支原体 Mycoplasmaarginini(Ma) Mycoplasmagallisepticum(MG)鸡毒支原体 莱氏胆甾支原体 Acholeplasmalaidlawii(AI) Ureaplasma 解脲脲原体 urealyticum(Uu) Indirectimmunofluorescence assay(IFA)间接免疫荧光测定 immunosorbent Enzyme—linked assay(ELISA)酶联免疫吸附测定 chain Polymerase reaction(PCR)聚合酶联反应 Monoclonal antibody(Mab)单克隆抗体 Western 免疫印迹 blot(Wb) SDS—polyacrylamidegel 凝胶电泳 抗生殖支原体单克隆抗体的鉴定 及临床应用研究 摘 要 目的：生殖支原体(MycoplasmagenitaliumMg) 是1981年Tully等首次从男性非淋病性尿道炎(NGU) 患者的生殖道中分离获得。f研究表明，它与人类尿道 炎、宫颈炎及盆腔感染有关，因Mg营养要求高，培 养周期长，分离难度大，临床Mg检出率低，国外多 采用DNA探针和PCR等分子生物学技术，分析Mg 的感染状态以及进行相关的研究。国内Mg的研究较 晚，1997年由赵季文首次分离培养成功，国内的PCR 技术，多为研究室采用，而临床检测往往受条件所限， 易出现假阳性，为了更好地研究Mg的生物学特性及 适应临床Mg感染的快速诊断，军科院辛颜彬教授在 国内率先制备了3株Mg单抗(1E12、4E7、387)， 本研究在此基础上，对3株Mg单抗的性质进行了鉴 定，并应用此抗体初步建立了Mg抗原的免疫学检测 方法，包括间接免疫荧光法(IFA)和双抗体夹心ELISA 法，通过PCR技术对照，对Mg国际标准株及部分临 床标本进行了检测。【旨在建立一种快速、敏感又简便 易行的Mg检测法，以满足实验研究及临床检测的需 要。 实验方法：1．3株Mg单抗生物学特性的鉴定 中文摘耍 1．1 Mg单抗特异性的鉴定：采用Mg单抗作+抗行IFA 法与肺炎支原体、解脲脲原体、口H夺支原体、猪异支 原体、精氨酸支原体、莱氏无胆甾原体、鸡毒支原体、 鸡涓惕其囊支瞒i体等八种支原体做交义反应试验。 1．2 Mg单抗、世类的鉴定：用杂交疳i细胞(1E11、387、 4E7)培养上清浓缩液与羊抗鼠IgGI、IgG2。、IgG!h、 IgG，lgM、轻链K、凡免疫血清做双向琼脂扩敞实 验。 1．3免疫印迹试验(Western Blot)：将Mg纯化浓缩 裂解后，行SDS．PAGE，电转移到硝酸纤维膜卜，阿 进行酶联免疫反应，DAB显色。 1．4杂交j自f细胞染色体分析：将培养24小时的杂交 瘤细胞离心、悬浮、计数，用O．075MKCI溶液低渗 裂解后，IIf崞一冰乙酸固定，Giemsa染色，染色体计 数。 1．5 IFA法和ELISA Mg单抗腹水效价的测定：采JtJ 法测得3株Mg单抗腹水效价。 2．Mg抗圬i检测法的建立：PCR技术、严行测定 2．1间接免疫荧光法(IFA)：将Mg国际标准凶株培