抗癌药物亚硒酸钠诱导的Jurkat细胞凋亡的可能机理分析.pdfVIP

摘要 微管在细胞的许多过程中发挥着重要作用，如有丝分裂、胞内运输、膜围细胞器的定 何以及细胞形态保持等等。微管能根据细胞的需要改变其组织形式及稳定性，从而完成其 功能。微管的功能依赖于其动态不稳定性。 微管是许多抗癌药物(如紫杉醇、秋水仙素及长春花碱)作用的靶子。在较高浓度下， 这些试剂或促进微管蛋白聚合。增加纺锤体微管的量；或抑制其聚合，减少纺锤体微管的 坩。任斗11对较低的浓度下，这些药物可以不影响微管的量而强烈抑制微管的动态不稳定性． 硒是生物系统的一种必需微量元素，能够调节许多胞内蛋白的功能。而大多数受其调 节的蛋白与胞内信号转导有关。亚硒酸钠能够引起自血病细胞凋亡并作为一种治疗白血病 的药物，但其作用机理仍不清楚。亚硒酸钠是否会象紫杉醇等抗癌药物一样以微管蛋白作 为靶于? 为了解答这个问题，我们研究了亚硒酸钠对白血病细胞株Jurkat细胞中微管的作用。 我t／JhE实：209M亚硒酸钠处理48小时后，Jurkat细胞发生凋亡。处理细胞呈现典型的凋亡 特征：DNA梯状电泳。核固缩现象，细胞间松散。免疫荧光标记结果表明，处理细胞没有 正常的网络状微管，而是呈现弥散状分布。 我们还研究了亚硒酸钠对微管蛋白体外聚合的影响。其中一组实验是在相同的微管蛋 Fj体系中加入不同浓度的亚硒酸钠，然后加入GTP，37C聚合．离心，沉淀为聚合的微管， 而I一清液为未聚合的微管蛋白。另一组实验是在聚合好的微管溶液中加入不同浓度的亚硒 酸钠，继续37{2水浴，离心。SOS～PAGE结果表明，亚硒酸钠不仅能抑制微管蛋白聚合，还 能促进微管解聚。 电镜负染结果表明，其它条件相同时，正常聚合的微管形成稠密的网络状，而加入亚 硒艘钠后聚合的微管则很稀少，而且长度大大变短。证明亚硒酸钠确实能抑制微管聚合。 我们证明了致硒酸钠能与微管蛋白结合。首先，在非变性电泳中，加入亚硒酸钠的锾 管蛋自的备寡聚体的迁移率比对照增大。这可能是因为微管蛋白与SeOl结合后．增加了负 G-25脱盐柱除去游离 电衍的缘故。其次，微管蛋白与过量亚硒酸钠反应后，用Sephadex 的哑硒酸钠，发现蛋白中存在相当数量的硒。结果表明每个微管蛋白二聚体能与3．46个亚 硒酸钠分子结合。再次，随着亚硒酸钠浓度的增高，微管蛋白的内源色氮酸荧光强度逐渐 降低。另外，我们证明亚硒酸钠能够改变微管蛋白的二级结构。这都说明亚硒酸钠与微管 贷l’1结合后改变了微管蛋白的构象。 哑硒酸钠对微管蛋白聚合的抑制作用能被DTT和B一巯基乙醇逆转，说明弧硒酸钠是通 过讯化一还原机制发生作用的。 l，1{， ， ff√ 关键词： Ⅱ硒酸钠，微管蛋白，聚埝，，凋亡，自血病细胞 lV Sodium Cancer Chemical， Selenite，aChemoprevention Induces theMicrotubules and Alters Assembly TCell Jurkat of Apoptosis ABSTRACT functions cell rolesin essential Microtubules(MTs)playimportant many