苏云金芽孢杆菌chiA,chiB全基因的克隆表达及其序列分析.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # ’!( ) ’!’ 年 月 日 $%% % ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! *+,-./0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 苏云金芽孢杆菌 ， 全基因的克隆、表达及其序列分析 .! ./ 陈艳玲 ，卢 伟 ，陈月华 ，肖 亮，蔡 峻 （南开大学生命科学学院微生物学系 天津市微生物功能基因组学重点实验室 天津 (%%%） 摘 要：以苏云金芽孢杆菌科默尔亚种#J( 菌株基因组KLJ 为模版，用,-G+AF-MB N5O 方法扩增几丁质酶5A?J 和 的全基因序列（ 登录号： 和 ）。将 产物连接 克隆载体，获得重组质粒 5A?P Q/BP;BD =2 %($( KR #$!! N5O ST5:7 ST5: !#$ 和ST5: !#% ，分别转化 E !’(# UV:P8G/。克隆的几丁质酶基因可以利用本身的启动子异源表达各自的 蛋白，不需要几丁质作为诱导物。表达的几丁质酶能够分泌到胞外。证明 菌株可组成型表达 种几丁质酶。 #J( $ 经核苷酸及氨基酸序列分析证明， 基因全长 ，含有 的上游非编码区和 的 ，编码 个 !#$ !$9.S (!( .S %’( .S *O2 (9% 氨基酸。推测成熟蛋白分子量为(9DK，只有一个几丁质酶催化域。!#% 基因全长$$6 .S，含有$!’ .S 的上游非编 码区和 的 ，编码 个氨基酸。推测成熟蛋白分子量约为 ，具有三个功能域。核苷酸序列分析 $%( .S *O2 99 % W9DK 显示 和 的启动子所处的位置及转录起始碱基都不相同， 区相同，而 区有两个碱基不同， 序列 !#$ !#% H (# H % XK 也不完全一致。 关键词：苏云金芽孢杆菌； ； ；组成型表达；序列分析 5A?J 5A?P 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） R6(( J %%%:9$%6 $%% %#:%’!(:%9 苏云金芽孢杆菌（ 简称 ） %)!#((*+ ,*-#./#0.+#+ %, ! 材料和方法 能够产生杀虫晶体蛋白，已成功用于多种农、林、果、 蔬害虫的防治。几丁质酶可有效的抑制真菌的生长