黑曲霉T3-5-1高活力单宁酶的制备及其性质研究.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2014, Vol.30, No.3 黑曲霉T3-5-1 高活力单宁酶的制备及其性质研究 1,2 3 3 1 1 1 1 张帅 ，陈遂 ，黄景晟 ，林健辉 ，农嘉仪 ，朱华伟 ，曹庸 （1 华南农业大学食品学院，广东广州 510642）（2 肇庆学院化学化工学院，广东肇庆 526061） （3 广州市质量监督检测研究院，广东广州 510110） 摘要：用黑曲霉T3-5-1 生产单宁酶，将粗酶液分别采用硫酸铵沉淀法和透析法初步纯化，结果表明，使用截留分子量 12 kDa 的透析袋对粗酶液透析后的比活力(3108.58 U/mg)，高于硫酸铵沉淀法处理后的比活力(2939.38 U/mg) 。然后对透析样品用Sephadex G-100 葡聚糖凝胶层析法进一步纯化，得到纯度较高的单宁酶，通过与单宁酶A 及单宁酶B 进行GPC 色谱图比较发现，其分子量基 本一致，但黑曲霉T3-5-1 单宁酶的比活力(5304.78 U/mg)，远高于单宁酶A(1788.15 U/mg)和单宁酶B(935.07 U/mg) 的比活力。该单宁 酶性质研究表明：其最适pH 值为5.0，最适反应温度为40 ℃，且其酸碱稳定性和热稳定性良好。当底物为没食子酸丙酯时，最大酶 促反应速率Vmax 为81.96 μmol/(L·min) ，米氏常数Km 为0.85 mmol/L。最后考察了该单宁酶的催化合成能力，结果表明，在AOT 异辛烷反胶束体系中，该单宁酶可催化没食子酸和丙醇反应合成没食子酸丙酯。 关键词：黑曲霉T3-5-1；单宁酶；纯化；酶学性质；反胶束 文章篇号：1673-9078(2014)3-137-143 Preparation and Properties of High Activity Tannase with Aspergillus niger T3-5-1 1,2 3 3 1 1 1 1 ZHANG Shuai , CHEN Sui , HUANG Jing-sheng , LIN Jian-hui , NONG Jia-yi , ZHU Hua-wei , CAO Yong (1.College of Food Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China) (2.College of Chemistry and Chemical Engineering, Zhaoqing University, Zhaoqing 526061, China) (3.Guangzhou Quality Supervision and Testing Institute, Guangzhou 510110, China) Abstract: Tannase was produced by Aspergillus niger T3-5-1, then the crude enzyme was preliminary purified by ammonium sulfate precipitation and dialysis respectively. The results showed that, specific activity of the crude enzyme dealed with dialysis sack of 12 kDa MWCO was higher than that of ammonium sulfate prec