微生物快速检测方法及应用进展.pdfVIP

辽孝压学窿学报 JLiaoningMedicalUniversitv2008… ．2‘9(6) 564 tv 微生物快速检测方法及应用进展 翟旭 ，孙靖靖 综述，柳晓琳 审校 (1．锦州市凌河区疾病预防控制中心；2．辽宁医学院，iI宁锦州 121000) 中图分类号：TS201．3 文献标志码：A 文章编号：1674—0424(2008)06—0564—03 随着人们生活水平不断提高，各种安全问题越 检出率上差异无统计学意义，且菌落典型，易判 来越受到人们的重视，微生物的污染问题也相应地 定。纸片荧光法利用细菌产生某些代谢酶或代谢产 备受关注。在食品和环境等各个方面都有微生物污 物的特点而建立的一种酶一底物反应法。只需检测 染的可能，一旦污染，微生物将大量繁殖而导致食 食品中大肠菌群、大肠杆菌的有关酶的活性，将荧 源性疾病或环境污染甚至医院内感染。特别是近年 光产物在 365nm紫外光下观察即可。同时纸片可 来随着环境污染的加剧和生态平衡的不断破坏，导 高压灭菌处理，4~C保存，简化了实验准备、操作 致感染的致病菌的种类越来越多，病原微生物对人 和判断 J。但 由于它们价格昂贵，限制了在基层 类的威胁越来越大。传统的检验方法，主要包括形 单位的实际应用。 态检查和生化方法，其准确性、灵敏性均较高，但 2 生物化学技术 涉及的实验较多、操作烦琐、需要时问较长、准备 和收尾工作繁重，而且要有大量人员参与 ¨J。所 2．1 PCR技术 PCR技术采用体外酶促反应合成 以，迫切需要准确、省时、省力和省成本的快速检 特异性DNA片段，再通过扩增产物来识别细菌。 验方法。本文对微生物快速检测方法的进展情况及 由于PCR灵敏度高，理论上可以检出一个细菌的 实际应用进行综述，以利于预防食源性疾病及公共 拷贝基因，因此在细菌的检测中只需短时间增菌甚 卫生突发事件的发生。 至不增菌，即可通过PCR进行筛选，节约了大量 时间，但 PCR技术也存在一些缺点：食物成分、 l 即用型纸片法 增菌培养基成分和其他微生物DNA对Taq酶具有 3M公司的 perrifilmTMPlate系列微生物测试 抑制作用，可能导致检验结果假阴性；操作过程要 片，可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和 求严格，微量的外源性DNA进人PCR后可 以引起 酵母计数 。由RCPScientificInc公司开发上市的 无限放大产生假阳性结果，扩增过程中有一定的装 Regdigel系列，除上述项Et外还有检测乳杆菌、沙 配误差，会对结果产生影响。由于以上原因，PCR 门氏菌、葡萄球菌的产品 J，这两个系列的产品 技术对操作者的自身素质要求很高，对于基层单位 与传统检测方法之间的相关性非常好。如用大肠菌 而言难以做到。短时间内也不会有经济效益和社会 群快检纸片检测餐具的表面，操作简便、快速、省 效益，因此影响了这项技术在基层的应用。 料，特异性和敏感性与发酵法符合率高，已经被列 2．2 基因探针技术 基因探针技术利用具有同源 为国标方法。使用时应正