斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定.pdfVIP

第 26 卷第 8 期 第 　三 　军 　医 　大 　学 　学 　报 Vol. 26 , No. 8 　　　　 　　　　 720 2004 年 4 月 ACTA 　ACADEMIAE 　MEDICINAE 　MILITARIS 　TERTIAE Apr. 2004 ( ) 论著 　　　 文章编号 2004 斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定 (第三军医大学基础医学部病原生物学教研室 ,重庆 400038) 段文元 ,张锡林 ,王 　英 　　 　　提 　要 : 目的 　获得表达斯氏狸殖吸虫半胱蛋白酶基因片段编码多肽 ,对其免疫反应性作初步研究 ,在吸虫所致疾 病的血清学诊断的应用奠定基础。方法 　用 PCR 法扩增目的基因片段 ,1 %琼脂糖凝胶回收纯化后与 PinPoint T 载体相 连 ,并导入到大肠杆菌JM109 菌株中去 ,诱导表达其编码的多肽片段。用裂解液制备抗原标本 ,经 SDSPAGE 电泳后,经考 马斯亮蓝和生物素链亲合素碱性磷酸酶染色检测其表达情况 ,Westernblotting 鉴定其免疫反应性。结果 　转化实验共获得 8 株阳性重组子 ,经测序鉴定证实仅 1 株正向连接。经过诱导表达 ,制备重组抗原标本 ,经 SDSPAGE 、转膜后生物素链亲 3 和素碱性磷酸酶系统染色显示在 32 ×10 处有一融合蛋白条带 ,反向连接菌株与之相似 ,也出现一条表达带 ,但分子量远 3 3 小于预期值 ,仅仅 14 ×10 左右。Westernblotting 显示仅正向连接菌株在 32 ×10 的位置有一阳性染色条带。结论 　成功 的构建了斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶的原核表达载体 ,经过诱导后表达的重组抗原 ,具有良好的免疫反应性。 　　关键词 : 斯氏狸殖吸虫 ;融合蛋白 ;半胱氨酸蛋白酶 　　中图法分类号 : R383. 2 ; Q556. 9 ; Q786 　　　 文献标识码 : A Expression and identification of cysteine proteinase from adult worm of Pagumogoni mus skrjabini in Escherichia coli DUAN Wenyuan , ZHANG Xilin , WANG Ying (Department of Pathogenic Biology , College of Basic Medicine , Third Military Medical University , Chongqing 400038 , China) 　　Abstract : Objective 　To express the recombinant antigen coded by Pagumogonimus skrjabini adult cysteine pro tease gene fragment and to inve