恶性疟原虫肝素结合蛋白质pf3d7＿1104400 的原核表达与多克隆 .pdf

吉林农业大学学报　 ２０１７，３９（１）：１００～１０５ ｈｔｔｐ：／ ／ ｘｕｅｂａｏ．ｊｌａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｊｌｎｄｘｂ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ 恶性疟原虫肝素结合蛋白质 ＰＦ３Ｄ７＿１１０４４００ 的原核表达与多克隆抗体的制备∗ 黄　 朋，赵帅杰，陆慧君，尹继刚，姜　 宁，陈启军∗∗ 吉林大学人兽共患病研究所，人兽共患病研究教育部重点实验室，长春 １３００６２ 摘　 要：为研究肝素结合蛋白质ＰＦ３Ｄ７＿１１０４４００ 的功能以及其作为疟疾疫苗候选抗原的可行性，通过ＰＣＲ 方法扩增目的基因，并将其与ｐＥＴ⁃２８ａ和ｐＧＥＸ⁃４Ｔ⁃１表达载体连接构建重组表达质粒。 将构建成功的重组表 达质粒转化入大肠杆菌ＢＬ２１⁃ＣｏｎｄｏｎＰｌｕｓ（ＤＥ３）⁃ＲＩＰＬ 中诱导表达，利用亲和层析的方法纯化Ｈｉｓ⁃ｔａｇ 和ＧＳＴ⁃ ｔａｇ 重组蛋白质。 用Ｈｉｓ⁃ｔａｇ 重组蛋白质免疫家兔制备多克隆抗体，以该抗体为一抗，利用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测该 抗体的特异性以及ＰＦ３Ｄ７＿１１０４４００ 蛋白质在虫体内是否表达。 结果表明：成功构建重组表达质粒ＰＦ３Ｄ７＿ １１０４４００⁃ｐＥＴ和ＰＦ３Ｄ７＿１１０４４００⁃ｐＧＥＸ，诱导表达并纯化出特异性好、纯度高的重组蛋白。 制备的多克隆抗体 能够特异性识别虫体天然蛋白，ＰＦ３Ｄ７＿１１０４４００蛋白质在恶性疟原虫体内全长表达。 关键词：恶性疟原虫；肝素；原核表达；多克隆抗体；疫苗候选抗原 中图分类号：Ｓ８５５９９　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 文章编号：１０００⁃５６８４（２０１７）０１⁃０１００⁃０６ ＤＯＩ：１０．１３３２７／ ｊ．ｊｊｌａｕ．２０１６．３３１６ 引文格式：黄朋，赵帅杰，陆慧君，等．恶性疟原虫肝素结合蛋白质ＰＦ３Ｄ７＿１１０４４００ 的原核表达与多克隆抗体 的制备［Ｊ］．吉林农业大学学报，２０１７，３９（１）：１００⁃１０５． Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｆ Ｈｅｐａｒｉｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＰＦ３Ｄ７＿１１０４４００ ｏｆ Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ ＨＵＡＮＧ Ｐｅｎｇ，ＺＨＡＯ Ｓｈｕａｉｊｉｅ，ＬＵ Ｈｕｉｊｕｎ，ＹＩＮＪｉｇａｎｇ，ＪＩＡＮＧ Ｎｉｎｇ，ＣＨＥＮ Ｑｉｊｕｎ∗∗ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｚｏｏｎｏｓｉｓ，Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００６２，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｒｉｎ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ＰＦ３Ｄ７＿１１０４４００ ａｎｄ ｉｔｓ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ａｓｃａｎｄｉｄａｔｅｖａｃｃｉｎｅａｎｔｉｇｅｎ，ｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙ ＰＣＲｗｈｏｓｅｐｒｏｄｕｃｔｓｗｅｒｅｃｏｎ⁃ ｎｅｃｔｅｄｗｉｔｈｐＥＴ⁃２８ａａｎｄｐＧＥＸ⁃４Ｔ⁃１ｆｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄｓ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ＢＬ２１⁃ＣｏｎｄｏｎＰｌｕｓ（ＤＥ３）⁃ＲＩＰＬ，ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｓｗｅｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｎｄｒｅｃｏｍ⁃ ｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅ ｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗａｓｐｒｅ⁃ ｐａｒｅｄ ｂｙ ｒａｂｂｉｔｓ ｉｍｍｕｎｅｄｗｉｔｈ Ｈｉｓ⁃ｔａｇｇｅｄ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ． Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｎｄ ｅｘ⁃ ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ ＰＦ３Ｄ７＿１１０４４００ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒ