猪α 干扰素在家蚕中表达及其抗病毒活性测定 - 生物技术进展.pdf

生物技术进展 2013 年　 第3卷　 第4期　 252 ~ 256 ■■■■■■■■ ■ 研究论文 ■ Current Biotechnology　 ISSN2095-2341 ■ Articles ■ ■■■■■■ 猪α干扰素在家蚕中表达及其抗病毒活性测定 1 2 3 3 1∗ 钟鲁龙 ,　 易咏竹 ,　 丁　 农 ,　 张金卫 ,　 柳纪省 1.中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部草食动物疫病重点开放实验室,兰 州730046; 2.中国农业科学院蚕业研究所,江苏 镇江212018; 3.湖州市农业科学院,浙江 湖州313000 摘　 要: 本研究利用家蚕杆状病毒表达系统在家蚕中表达猪α干扰素。 首先优化并合成猪α 干扰素基因,将其克隆到 杆状病毒转移载体pVL1393 的多角体基因启动子下游,与线性化的Bm-BacPAK6 DNA共转染至Bm-N细胞,在细胞内进 行同源重组后,纯化得到重组病毒。 Western 杂交结果显示,在蚕血淋巴中可检测到猪α 干扰素表达。 用微量细胞病变 6 抑制法在Vero/ VSV∗GFP 系统上进行干扰素活性测定,结果表明重组猪α干扰素有抗病毒活性,效价达到10 U/ mL 以 上,证明在家蚕幼虫体内成功表达了有活性的猪α干扰素。 关键词: 猪干扰素;抗病毒活性;家蚕;杆状病毒;真核表达 DOI:10.3969/j.issn.2095-2341.2013.04.05 Expression of Porcine Interferon-alpha in Silkworm,Bombyx mori and its Antiviral Activity Detection 1 2 3 3 1∗ ZHONG Lu-long ,YI Yong-zhu ,DING Nong ,ZHANGJin-wei ,LIUJi-xing 1.State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology;Key Laboratory of Grazing Animal Dieases,Ministry of Agriculture;Lanzhou Veterinary Research Institute,ChineseAcademy of Agricultural Sciences,Lanzhou730046,China; 2.SericulturalResearch Institute,ChineseAcademy of Agricultural Sciences,Jiangsu Zhenjiang 212018,China; 3.HuzhouAcademy of Agricultural Sciences,Zhejiang Huzhou313000,China Abstract:Porcine interferon-alpha(PoIFNα) was expressed in silkworm larvae using silkworm-baculovirus expression system. The porcine interferon-alpha genewas artificially synthesized after codon optimization. The optimized target gene was cloned to the baculovirus transfe