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The key of Prokaryotic protein expression and purification 北京全式金生物技术有限公司 ☏：400-898-0321 上篇 原核表达 • 原核表达概述 • 原核表达策略选择 • 表达结果验证 • 常见问题与实验例 原核表达概述 原核表达原理概述 表达载体 表达菌株 表达条件 原核表达原理概述 目的基因 构建 转化 培养，诱导 表达载体 重组载体 表达菌株 “基因——载体——菌株——培养” 表达载体 • 启动子 • 融合标签 • 常用表达载体系统 常见启动子 • λ 启动子： 热诱导启动子 pL • trp启动子： 化学诱导启动子 • trc启动子： trp+lac杂交启动子 • tac启动子： trp+lacUV5杂交启动子； pGEX （Pharmacia）、pMal （NEB） •T7/T7lac启动子： pET （Novagen）、pEASY-E1/E2 （Transgen ） T7启动子 T7lac启动子 融合标签 • 常用于蛋白检测与纯化。 • 有时也可增加蛋白可溶性、将蛋白运转至特定位置。 N端融合： 易于构建。终止密码子来自载体/基因 表达量高 提前终止会干扰纯化 二级翻译起始不影响纯化 C端融合： 构建时注意避免移码 基因不能自带终止密码子 提前终止不影响纯化 二级翻译起始会干扰纯化 常用融合标签 • His·Tag pET系统 • GST·Tag pGEX系统 • MBP·Tag pMal系统 常用表达载体系统 系统名称 公司 启动子 抗性 常用标签 特点 pGEX GE tac Amp GST·Tag 可溶性表达，纯化难以控制，谷 (Pharmacia) 胱甘肽 一步洗脱，得到的蛋白纯 度较低,通常需要去掉GST·Tag pMal NEB tac Amp MBP·Tag 可溶性表达，纯化难以控制，麦 芽糖一步洗脱，得到的蛋白纯度 较低,通常需要去掉MBP·T