样品稀释对照（通常稀释100倍以上） 样品原液主斑点样品 - 湖南大学.ppt

第五讲　薄层层析在药物分析中的应用 湖南大学化学化工学院 药物分析教研室 内容提要 薄层层析（TLC）的特点 TLC板的种类及用途 TLC自制板技术 TLC点样要点 TLC在药物分析中的应用 薄层层析（TLC）概述 TLC是一种以涂布于支持板上的支持物作为固定相(约0.2-0.3 mm厚)，以合适的溶剂为流动相（又称展开剂），对混合样品进行分离、鉴定和定量的一种层析分离技术。在有机化学、药物分析中应用十分广泛。 分离原理 固定相可吸附被测物质，展开剂则溶解被测物质并带其前进，二者争夺被测物质，由于各物质的差异，在展开剂向前运动时，不同的物质停留在薄层板的不同之处。 TLC的特点 TLC与HPLC的比较 TLC板的种类及用途 按固定相的材质可分为：硅胶、氧化铝、聚酰胺、纤维素等，其中最常用的是硅胶。 按固定相的极性可分为：正相薄层层板与反相薄层层析，其中前者居多,亦有以十八烷基键合硅胶为固定相的反相薄层板。 硅胶板的分类 预制薄层板 薄层板的展开剂 展开剂的选择 展开剂起两方面作用：一是溶解被测物质；二是带着被测物质在薄层板上前进，在前进的同时与薄层板上的硅胶争夺被测物质。 要满足上述两个条件，单一的溶剂通常做不到。一般要采用两种或三种溶剂混合才能达到上述效果。 极性相差太大的溶剂不能混溶，往往需要其它溶剂的调节。 展开剂可采用不相混溶的溶剂混合后根据实际情况取上层或下层。 未知物TLC展开剂的摸索 对于未知化合物，通常先以各种溶剂尝试溶解性，大致断极性大小。 展开剂通常以中等极性的三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯为主体（占75%以上），分别添加极性的溶剂（如：甲醇、水、冰醋酸）或非极性溶剂（如：石油醚、正己烷）为初始展开剂。 根据实验结果再进行逐步调整。硅胶为正向色谱材料（即固定相为极性），因此增加极性展开剂有助于增大物质的Rf值，有利于分离。 碱性物质在展开时，于展开剂中适当加入氨水有利于展开。 示例1：盐酸乙胺丁醇的杂质检查 　　　　　展开剂： 乙酸乙酯－冰醋酸－盐酸－水（11:7:1:1） 示例2:盐酸萘甲唑啉的有关物质检查 示例3:联苯双酯的有关物质检查 示例4:磷酸氯喹的有关物质检查 斑点的定位 薄层层析的显色剂 荧光薄层板的显色剂　 　　不需要显色剂。在荧光背景下，物质斑点呈暗斑，易于识别。紫外仪有254nm（掺入锰激活的硅酸锌）及365nm（掺入银激活的硫化锌、硫化镉）两个波长可供选择。 普通板的显色剂 　　根据情况选用不同的显色剂。 常用的显色剂 点样技巧 尽可能使点样的原点小一点，这样在跑板过程中横向扩散少。 点样后立即吹干，减少扩散。 平行的样品点之间保留适当的间距。 尽量不要太靠近边缘，因边缘效应可影响色谱行为。 自制薄层板技术 在药物分析中，预制薄层板并不是能完全满足要求。有时根据需要，可以自制硅胶薄层板。 高效薄层板 常规的薄层板多采用200-300目（粒径约75um-50um）的硅胶。 高效薄层板采用5-10um粒径的硅胶。与常规薄层板相比分辨率提高、更加灵敏，分析速度亦快（同一样品比普通TLC的展距要小）。 影响Rf值的因素 不同展开剂可使Rf值变化 薄层层板的分析应用 薄层扫描仪定量测量 TLC在药物分析中的应用 药物的真伪鉴别 　　对照品法，以Rf值判断真伪。 药物的杂质检查 　　已知杂质：对照品法，以斑点颜色深浅判断杂质是否超限。 　　未知杂质：样品稀释法。对比稀释主斑点与稀释前的杂质斑点的大小。 药材中主要成份的鉴别 对照品 药品中杂质的检查：已知杂质 取已知杂质对照品按一定浓度配制，与样品平行点样。 比较样品中杂质的斑点与杂质对照品斑点比较，不得更深。 药品中杂质的检查：未知杂质 在《中国药典》中，不要求任何一种杂质都要知道结构。有些未知杂质的限量即通过TLC来检查（更多地是采用HPLC检查）。 药典中关于大黄的薄层检查 大黄项下通过薄层色谱 1鉴别：要求显示5个主要成份的斑点 2检查：要防止掺入常见伪品土大黄 利福平：鉴别 左炔诺孕酮：已知杂质的限量检查 非诺洛芬钙：未知杂质的限量检查 谢　谢 样品稀释对照（通常稀释100倍以上） 样品原液主斑点 样品原液杂质斑点 左炔诺孕酮的已知杂质： 　　炔雌醚 * 化学专业选修课 最佳范围 0.3-0.5 可用范围 0.2-0.8 1、比移值(Rf值) 溶质移动距离与流动相移动距离之比。　 a、b为原点至斑点中心的距离， C 为原点至溶剂前沿的距离 TLC的定性参数 优点： 速度快：仅需几分钟至十几分钟，可同时展开多个试样 试样预处理简单、对试样限制少 分离能力较强，所有物质都可呈现出来 灵敏度较高 检测受限制程度小：有无紫外吸收均可 仪器简单、价格低廉 缺点： 　定性测定为主，定量测量需采用薄层扫描仪 　分离物质量少（