pp2a b56α调节亚基原核表达载体的构建及表达 - 南京师范大学学报 .pdf

第39卷第3期 南京师大学报（自然科学版） Vol.39 No.3 2016年9月 JOURNALOFNANJINGNORMALUNIVERSITY（NaturalScienceEdition） Sept，2016 doi：10.3969/j.issn.1001-4616.2016.03.013 PP2AB56α调节亚基原核表达载体的构建及表达 赵亚平，程晓清，孙晓莉，李良渊，张 朝 （南京师范大学生命科学学院，江苏省分子医学生物技术重点实验室，江苏南京210023） ［摘要］ 为了构建PP2AB56α调节亚基原核表达载体，以pCEP-4HA-B56α质粒为模板，设计引物克隆人源 PP2AB56αcDNA，连入pGEX-4T- 1载体中，测序正确后，转化E.coliBL21（DE3），IPTG诱导表达，并将诱导表达 重组蛋白的菌体超声破碎后，进行可溶性分析，对可溶性蛋白进行纯化.SDS电泳及WesternBlot分析鉴 定重组蛋白.结果表明，经测序和酶切鉴定后成功构建重组质粒pGEX-4T- 1-B56α，表达大小约79kD 的重组蛋 白，可溶性表达的重组蛋白为菌体总蛋白质量的8.6%，经GST纯化系统纯化得到纯度约为78.9%的重组蛋白， 回收率达到52.2%.因此，本研究成功构建了PP2AB56α原核表达体系，获得重组蛋白，为研究PP2AB56α 的生 物学功能奠定了基础. ［关键词］ PP2A，B56α，原核表达 ［中图分类号］Q28 ［文献标志码］A ［文章编号］1001-4616（2016）03-0074-05 ConstructionofProkaryoticExpressionVectorConjugated withB56αRegulatorySubunitofPP2A ZhaoYaping，ChengXiaoqing，SunXiaoli，LiLiangyuan，ZhangZhao （SchoolofLifeSciences，NanjingNormalUniversity，JiangsuKeyLaboratoryforMolecularandMedicalBiotechnology，Nanjing210023，China） Abstract：pCEP-4HA-B56αwasusedasatemplatetoconstructtheprokaryoticexpressionvectorofPP2AB56α，prim⁃ ersweredesignedaccordingtocDNAsequencetoclonethegene.TheamplifiedcDNAfragmentwasinsertedinto pGEX-4T- 1vector.Positivecloneswereverifiedviasequencing.TherecombinantplasmidwastransformedintoBL21 E.coli.FragmentationofIPTG-inducedE.coli culturewasachievedbysonicationonice.Solubleandinsolublefractions wereseparatedandanalyzed.Lastly，solublefractionwaspurified.Resultsshowedthat，theconstructedplasmidcon⁃ tainedthefragmentofPP2AB56α.Therecombinantproteinwasabout 79 kDandsolublerecombinantproteinwas about8.6%oftotalbacteriaprotein.ThepurificationofGST-taggedB56αwasperformedbyuseofGSTpurificationsys⁃ tem.Thepurityofrecombinantproteinwasreachedto78.9%amon