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n －糖酰胺酶f（ pngase f）在大肠杆菌中的表达纯化及其脱糖基化
4 2 4 ( ) Vol ． 4 2 ，No ． 4
第 卷第 期 上海师范大学学报 自然科学版
2 0 1 3 8 Journal of Shanghai Normal University (Natural Sciences) Aug ． ，2 0 1 3
年 月
N － 糖酰胺酶F (PNGase F)在大肠杆菌中的
表达纯化及其脱糖基化作用鉴定
*
， ，
闵伟勇 刘 丽 张 舟
( ， 200234)
上海师范大学生命与环境科学学院 上海
摘 要:N － 糖酰胺酶F (PNGase F)是由革兰氏阴性菌———脑膜炎脓杆菌分泌的一种分子量
34 ． 8 kDa ． PCＲ 945 bp N － F ，
为 的去糖基化酶 本研究通过 技术扩增出 的 糖酰胺酶 基因 经酶
、 ， pET28a － PNGase F． pET28a － PNGase F
切 连接 构建了大肠杆菌表达载体 将 转入大肠杆菌
BL21 ，16 ℃ Ni ，SDS － PAGE ， 95%
中 诱导表达及 柱纯化后 鉴定 获得超过 纯度的可溶性表达
N － F． Na + 1 (SNAT1) 2 (SNAT2)
的 糖酰胺酶 对 依赖的中性氨基酸转运蛋白 和 进行脱糖基化
， : N － F SNAT1 SNAT2 ．
作用检测 结果证明 纯化的 糖酰胺酶 对 和 具有高效的脱糖基化作用
:N － F ; ; SNAT ;
关键词 糖酰胺酶 可溶性表达与纯化 中性氨基酸转运蛋白 脱糖基化
+
: : :
中图分类号 Q 513 ． 2 文献标识码 A 文章编号 1000-5137 (2013)04-0372-06
0 引 言
N － F (PNGase F) ，
糖酰胺酶 主要是由脑膜炎脓杆菌等革兰氏阴性菌分泌的一种酰胺水解酶 分子
量为34 ． 8 kDa ， ［1 － 2］． N － F N － ，
也存在于一些真核生物细胞内
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