基于双抗体夹心传感膜的信号增强方法用于致癌基因c-myc 蛋白的检测.pdf

中国科学: 化学 2012 年 第42 卷 第6 期: 822 ~ 830 SCIENTIA SINICA Chimica SCIENCE CHINA PRESS 论 文 基于双抗体夹心传感膜的信号增强方法用于 致癌基因c-myc 蛋白的检测 * * 田雁飞, 曹忠, 何婧琳 , 孙鑫, 姚玉强 长沙理工大学化学与生物工程学院, 电力与交通材料保护湖南省重点实验室, 长沙 410004 *通讯作者, E-mail: zhongcao04@; jinglin_he2005@ 收稿日期: 2011-12-02; 接受日期: 2012-02-09; 网络版发表日期: 2012-03-31 doi: 10.1360/032011-792 摘要 采用层层自组装方法, 制备了一种基于双抗体夹心层修饰金电极的信号增强电 关键词 化学生物传感器, 即先通过组装 L- 半胱氨酸、戊二醛, 固定 c-Myc(9E10) 单克隆抗体 双抗体夹心层 电化学生物传感器 (C-Ab1), 形成C-Ab1 单抗修饰电极, 可识别致癌基因c-myc 蛋白; 再结合上第二抗体羊抗 c-myc 鼠免疫球蛋白G 抗体(C-Ab2), 形成C-Ab1/c-myc/C-Ab2 双抗夹心修饰电极, 响应信号大幅 致癌基因 度增强, 传感性能优于C-Ab1 单抗修饰电极. 通过电化学阻抗和循环伏安行为探讨了双抗 信号增强 夹心法信号增强的机理, 其阻抗值与c-myc 浓度对数在0.043~430 nM 范围内成良好的线性 关系, 线性方程可拟合为Y = 10046.10 + 863.33X, 线性相关系数为0.9904, c-myc 的最低检 测限也降低至25.76 pM. 该传感器制备简单, 选择性、重现性、稳定性和再生性好, 在鼠 血清样品中测得 c-myc 的回收率在97.4%~103.7%之间, 表明该方法可用于实际肿瘤样品 中c-myc 的检测, 在生物医学领域具有潜在的应用价值. 1 引言 使细胞转化为恶性表型, 癌基因的活化或抑癌基因 的失活均可启动或加速肿瘤的发生[16~20], 而其确切 随着生物学、材料科学的不断发展, 电化学生 的作用机制直到目前还值得进一步阐明, 对c-myc 的 物传感器以生物材料为敏感元件, 可控修饰功能好, 研究仍然是许多专家、学者探讨的热点之一[21, 22]. 具有高度的选择性, 已经成为一种最直接的生命反 由于c-myc 蛋白在多种肿瘤、癌症(如肺癌、乳 应过程检测方法[1~3], 且其具有灵敏度高、操作简单、 腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌、宫颈癌、视网膜母细胞 响应快速等优点, 已被广泛应用于生命医学和药学 瘤、成骨肉瘤、软骨肉瘤等) 的发生发展中起重要作 等领域[4~10]. 用[23~28], 因此快速检测c-myc 含量的变化, 对于癌症 在生物医学上, c-myc 基因是一种可以使细胞 的预防、诊治有着非常重要的意义. 目前检测c-myc 无限增值的原癌基因, 在调节DNA 合成、细胞分化、 的方法主要有: 免疫组化法[29~32] 、免疫组化双标记法 凋亡以及细胞周期的进程中起着极其重要的作 (SABC)[33] 、原位杂交法[34~36] 、酶联免疫分析法 用[11~13]. c-myc 原