适配体介导脂质体靶向递送sirna的研究.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（１）：５４６０ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 适配体介导脂质体靶向递送ｓｉＲＮＡ的研究 １ ２ ２ ２ ２ ２ 唐德平 　毛爱红 　王　芳 　张　虹 　王　黎 　廖世奇 （１兰州交通大学化学与生物工程学院　兰州　７３００７０　２甘肃省医学科学研究院　兰州　７３００５０） 摘要　为探讨适配体介导的脂质体靶向递送 ｓｉＲＮＡ的可行性，采用前列腺癌细胞膜表面抗原 （ＰＳＭＡ）的适配体Ａ１０３．２与脂质体结合，构建适配体脂质体靶向递送体系（ＡｐｔＬＰ），并利用 ＋  ＡｐｔＬＰ递送ｐＥＧＦＰＮ１质粒和Ｂｃｌ２ｓｉＲＮＡ到前列腺癌细胞ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ ）和ＰＣ３（ＰＳＭＡ），转 染４８ｈ后，用荧光显微镜检测绿色荧光蛋白的表达，ｑＰＣＲ检测Ｂｃｌ２ｍＲＮＡ表达，蛋白印记法检测 Ｂｃｌ２蛋白表达，Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８核染法分析体外抗肿瘤活性。结果显示：与脂质体递送体系相比， ＋ ＡｐｔＬＰ显著提高递送ｐＥＧＦＰＮ１质粒和Ｂｃｌ２ｓｉＲＮＡ到靶细胞ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ ）的效率；显著提高 ＋ Ｂｃｌ２ｓｉＲＮＡ诱导的靶细胞 ＬＮＣａＰ（ＰＳＭＡ ）Ｂｃｌ２基因沉默效应，更有效的诱导靶细胞 ＬＮＣａＰ ＋ （ＰＳＭＡ ）凋亡。结果表明：ＡｐｔＬＰ是一种有效的ｓｉＲＮＡ靶向递送体系，具有潜在的临床应用 价值。 关键词　适配体　ｓｉＲＮＡ　脂质体　靶向递送 中图分类号　Ｑ５２２ 　　ＲＮＡ干扰（ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ，ＲＮＡｉ）是一种由小干 Ａ１０适配体可与前列腺癌细胞膜表面抗原（ｐｒｏｓｔａｔｅ 扰ＲＮＡ（ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇＲＮＡ，ｓｉＲＮＡ）介导的序列特异 ｓｐｅｃｉｆｉｃｍｅｍｂｒａｎｅａｎｔｉｇｅｎ，ＰＳＭＡ）的胞外域特异性结 ［１］ ［５］ 性转录后基因沉默现象 。ＲＮＡｉ在阐明基因功能、鉴 合 ，已被研究用于将化疗药物、ｓｉＲＮＡ靶向递送到前 ［６１２］ 定药物靶点、开发靶向治疗药物等方面具有广泛应用。 列腺癌细胞 。但 Ａ１０适配体是含有 ７１碱基的 自２００４年第一个 ｓｉＲＮＡ类治疗药物进入临床试验以 ＲＮＡ分子，化学合成较为困难，限制了其在药物靶向递 来，现已证明与基因相关的疾病都可能成为ｓｉＲＮＡ潜 送中的应用。适配体 Ａ１０３．２是 Ａ１０适配体从７１到 在的靶点，如恶性肿瘤、病毒感染、遗传疾病、代谢紊乱 ３９碱基的截短体，更易化学合成，活性与特异性更高， ［１３１４］ 等，ｓｉＲＮＡ类治疗药物在临床上有着广泛的应用前 是Ａ１０适配体的优化形式 ? 。 景［２］。但ｓｉＲＮＡ存在血液稳定性差，半衰期短，易降解 　　为探讨ＰＳＭＡ特异性适配体介导的脂质体靶向递 等缺陷，ｓｉＲＮＡ特异、有效递送是ｓｉＲＮＡ类药物广泛应 送ｓｉＲＮＡ的可行性，本研究将适配体Ａ１０３．２的３′末 ［３］ 端连接胆固醇使其具有亲脂性，构建适配体脂质体靶 用的主要障碍之一 。 　　核酸适配体（ａｐｔａｍｅｒ）是一类可形成