兔白细胞介素 10基因的克隆、原核表达及其多克隆 - 畜牧兽医学报.pdf

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１３４４５ ７８８７９５ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 ： ／ ｄｏｉ１０．１１８４３ ．ｉｓｓｎ．０３６６６９６４．２０１３．０５．０１７ ｊ 兔白细胞介素 基因的克隆、原核表达及其 １０ 多克隆抗体的制备 ， ， ， ， ， ， ， １２ １２ １２ １２ １２ １２ １ ２ 万小颖 ，秦立志 ，施丽娟 ，王文洲 ，李 挺 ，李碧春 ，吴信生 　 （ 扬州大学动物科学与技术学院，扬州 ； 江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室，扬州 ） １． ２２５００９ ２． ２２５００９ 摘 要：白细胞介素 （ ）是一种多功能的细胞因子，参与免疫调节和抗炎反应。本研究旨在克隆并表达 １０ＩＬ１０ 犐犔 　 １０基因，以制备兔 ＩＬ１０多克隆抗体。运用 ＲＴＰＣＲ技术从新西兰白兔脾脏总 ＲＮＡ中扩增 犐犔１０基因，将该基因 亚克隆入原核表达载体 并转入大肠杆菌 （ ）中诱导表达获得融合蛋白，融合蛋白经纯化后免疫 ｐＥＴ３２ａ ＢＬ２１ＤＥ３ 豚鼠制备多克隆抗体，最后分别用间接 和 检测抗体的效价和特异性。结果表明：克隆得到了 ＥＬＩＳＡ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 兔 基因，大小为 ，经核苷酸测序与 已登录的基因序列（ ＿ ）相似性为 ；重组 犐犔１０ ５３７ｂｐ ＧｅｎＢａｎｋ ＮＭ ００１０８２０４５ ９９％ 载体 构建成功； 电泳结果显示融合蛋白成功表达；制备的多克隆抗体效价高达 ， ｐＥＴＩＬ１０ ＳＤＳＰＡＧＥ １∶５６０００ 且具有很高的特异性。成功实现了兔 犐犔１０基因的原核表达，并制备了豚鼠抗兔 ＩＬ１０多克隆抗体，为深入研究兔 犐犔１０基因的功能奠定了基础。 关键词：白细胞介素 基因；克隆；表达；抗体制备 １０ 中图分类号： ； 文献标志码： 文章编号： （ ） Ｑ７８Ｓ８２９．１ Ａ ０３６６６９６４２０１３０５０７８８０８ 　　　　 　　　　 ， 犆犾狅狀犻狀 犘狉狅犽犪狉狅狋犻犮犈狓狉犲狊狊犻狅狀犪狀犱犘狅犾犮犾狅狀犪犾犃狀狋犻犫狅犱 犘狉犲犪狉犪狋犻狅狀狅犳 犵 狔 狆 狔 狔 狆 犚犪犫犫犻狋犐犔１０犌犲狀犲 ， ， ， ， ，