利用转录组测序技术鉴定紫花苜蓿根系盐胁迫应答基因 - 核农学报.pdf

１４７０ 核 农 学 报　 ２０１６，３０（８）：１４７０ ～１４７９ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＮｕｃｌｅａｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 文章编号：１０００⁃８５５１（２０１６）０８⁃１４７０⁃１０ 利用转录组测序技术鉴定紫花苜蓿 根系盐胁迫应答基因 马　 进　 郑　 钢 （浙江农林大学风景园林与建筑学院，浙江 临安　 ３１１３００） 摘　 要：盐害是影响紫花苜蓿生产力的主要非生物因素之一，鉴定控制这一复杂性状的基因将为苜蓿育 种计划提供关键信息。 为揭示紫花苜蓿在盐胁迫下基因表达谱的变化，以紫花苜蓿Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ为材料， 对正常培养（ＷＴ＿ＣＫ１）和盐胁迫（ＷＴ＿Ｎ１）条件下的２ 个样品根系进行转录组分析，同时利用实时荧光 定量ＰＣＲ（ｑＲＴ⁃ＰＣＲ）技术对部分关键基因的表达特点进行验证。 结果表明，紫花苜蓿根系在２５０ ｍＭ ＮａＣｌ胁迫７２ ｈ 时，共检测到３１９０７ 个基因表达量发生了改变，２ ７５８ 个基因的表达量差异达到２倍以 上，包括１９９ 个转录因子，其中１３３８ 个表达量上调，１４２０ 个表达量下调，这些差异表达基因功能主要 涉及次生代谢、代谢途径、激素代谢及信号转导和植物病原菌互作等。 ｑＲＴ⁃ＰＣＲ分析表明，６ 个随机选 择的基因在胁迫前后的表达特点与表达谱测序结果一致。 综上，紫花苜蓿根系对盐胁迫响应是一个多 基因参与、多个生物代谢过程反应协同调控的过程，基因表达量的变化可能是调控的主要方式。 此外， ＋ 本研究候选了一系列胆汁酸：Ｎａ 共转运蛋白、晚期胚胎发生富集蛋白、谷胱甘肽－ｓ－转移酶基因和转 录因子等与紫花苜蓿盐胁迫相关的应答关键基因，为揭示紫花苜蓿耐盐分子机制奠定了基础。 关键词：紫花苜蓿；盐胁迫；转录组测序；差异表达基因 ＤＯＩ：１０１１８６９／ ｊ．ｉｓｓｎ．１００⁃８５５１２０１６０８．１４７０ ２ 　 　 全球目前盐渍化土地约有９５５亿ｈｍ ，亚洲因盐 紫花苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）主要分布在温带地 ２［１］ 碱化减产的土地有 １亿 ｈｍ 。 在我国，各种盐渍化 区，是世界上最重要的豆科牧草之一，因其高营养价值 ２ 土地面积约０１亿ｈｍ ，占总耕地面积的７％。 在可耕 和高产等特性，有“牧草黄金”之称。 紫花苜蓿是对高 地面积不断减少而人口不断增长的形式下，如何解决 浓度盐分敏感的甜土植物，耐盐能力有限。 在盐胁迫 土地盐渍化的问题显得尤其重要。 因此，提高作物的 条件下，植物启动众多基因响应，目前已经获得部分盐 耐盐性，培育适合在盐碱地生长的植物品种是有效利 ［４］ 胁迫下紫花苜蓿耐盐基因。 Ｍｉｌｌｅｒ等 克隆出紫花苜 用盐渍化土地的主要方法。 蓿ＭｓＰＤＨ 和ＭｓＰ５ＣＤＨ ２ 个脯氨酸脱氢酶基因，它们 由于植物自身不能移动，在长期的自然进化中形 ［５］ 具有增加游离脯氨酸积累的功能；Ｌｕｏ 等 利用 ＲＴ⁃ 成一系列复杂的调控机制来感受外部胁迫并传递信 ＰＣＲ从紫花苜蓿中分离得到受胁迫诱导