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鸡骨钙素蛋白的原核表达及其生物学活性
摇 南京农业大学学报摇 2013,36(6):60-66 http:/ /
摇 Journal of NanjingAgricultural University doi:10.7685/ j.issn.1000-2030.2013.06.010
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江莎,张建鹏,姚大伟,等.鸡骨钙素蛋白的原核表达及其生物学活性[J].南京农业大学学报,2013,36(6):60-66
鸡骨钙素蛋白的原核表达及其生物学活性
1 1 1 1,2 1*
江莎 ,张建鹏 ,姚大伟 ,马晓平 ,侯加法
(1.南京农业大学动物医学院,江苏 南京210095;2.四川农业大学动物医学院,四川 雅安625014)
摘要:为获得具有生物活性的骨钙素蛋白,以鸡颅骨提取的总RNA为模板,RT鄄PCR法克隆鸡骨钙素成熟肽DNA,连接至原
核表达载体pET鄄32a(+),构建表达质粒pET鄄32a(+)鄄rchOC。 质粒转化 Rosetta鄄gami(DE3)pLyS宿主菌,IPTG诱导表达含
His标签的重组蛋白His鄄rchOC。 肠激酶酶切去除融合蛋白中的His标签后获得重组骨钙素蛋白(rchOC)。 通过与羟基磷
灰石结合试验、MTT及PNPP法分析该蛋白生物学活性。 结果显示:重组骨钙素蛋白能与羟基磷灰石结合,抑制成骨细胞
中碱性磷酸酶的表达,但不影响成骨细胞的增殖。 结论:经原核表达系统已成功获得鸡重组骨钙素蛋白,且该蛋白具有生
物活性。
关键词:鸡;骨钙素;pET鄄32a(+);Rosetta鄄gami(DE3)pLyS;蛋白表达;羟基磷灰石;成骨细胞
中图分类号:S831摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2013)06-0060-07
Expression of chicken osteocalcin inEscherichia coli
and its biologic activity
1 1 1 1,2 1*
JIANG Sha ,ZHANGJianpeng ,YAO Dawei ,MA Xiaoping ,HOUJiafa
(1.College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University,Nanjing210095,China;
2.College of Veterinary Medicine,Sichuan Agricultural University,Ya忆an625014,China)
Abstract:Theaimof thisstudy istoobtaintherecombinant chickenosteocalcinprotein(rchOC)withbiologicactivity byEscherichia
coli.Chicken osteocalcin genewas clonedfrom cranial bone of chick embryo and ligated into the multiple cloning sites of pET鄄32a
(+)for the construction of pET鄄32a(+)鄄rchOC.The protein,rchOCwith His鄄tag(His鄄rchOC)was expressed in E.coli Rose
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