鸡骨钙素蛋白的原核表达及其生物学活性.pdf

摇 南京农业大学学报摇 2013,36(6):60-66 http:/ / 摇 Journal of NanjingAgricultural University doi:10.7685/ j.issn.1000-2030.2013.06.010 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試 江莎,张建鹏,姚大伟,等.鸡骨钙素蛋白的原核表达及其生物学活性[J].南京农业大学学报,2013,36(6):60-66 鸡骨钙素蛋白的原核表达及其生物学活性 1 1 1 1,2 1* 江莎 ,张建鹏 ,姚大伟 ,马晓平 ,侯加法 (1.南京农业大学动物医学院,江苏 南京210095;2.四川农业大学动物医学院,四川 雅安625014) 摘要:为获得具有生物活性的骨钙素蛋白,以鸡颅骨提取的总RNA为模板,RT鄄PCR法克隆鸡骨钙素成熟肽DNA,连接至原 核表达载体pET鄄32a(+),构建表达质粒pET鄄32a(+)鄄rchOC。 质粒转化 Rosetta鄄gami(DE3)pLyS宿主菌,IPTG诱导表达含 His标签的重组蛋白His鄄rchOC。 肠激酶酶切去除融合蛋白中的His标签后获得重组骨钙素蛋白(rchOC)。 通过与羟基磷 灰石结合试验、MTT及PNPP法分析该蛋白生物学活性。 结果显示:重组骨钙素蛋白能与羟基磷灰石结合,抑制成骨细胞 中碱性磷酸酶的表达,但不影响成骨细胞的增殖。 结论:经原核表达系统已成功获得鸡重组骨钙素蛋白,且该蛋白具有生 物活性。 关键词:鸡;骨钙素;pET鄄32a(+);Rosetta鄄gami(DE3)pLyS;蛋白表达;羟基磷灰石;成骨细胞 中图分类号:S831摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2013)06-0060-07 Expression of chicken osteocalcin inEscherichia coli and its biologic activity 1 1 1 1,2 1* JIANG Sha ,ZHANGJianpeng ,YAO Dawei ,MA Xiaoping ,HOUJiafa (1.College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University,Nanjing210095,China; 2.College of Veterinary Medicine,Sichuan Agricultural University,Ya忆an625014,China) Abstract:Theaimof thisstudy istoobtaintherecombinant chickenosteocalcinprotein(rchOC)withbiologicactivity byEscherichia coli.Chicken osteocalcin genewas clonedfrom cranial bone of chick embryo and ligated into the multiple cloning sites of pET鄄32a (+)for the construction of pET鄄32a(+)鄄rchOC.The protein,rchOCwith His鄄tag(His鄄rchOC)was expressed in E.coli Rose