没食子酸抑制白念珠菌生物膜作用的研究 - 中国中药杂志.pdf

第３４卷第９期 Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　９ ２００９年５月 　　　　　　 　 　 　 　 　　　　　　 　 　 　 　　 Ｍａｙ，２００９ 没食子酸抑制白念珠菌生物膜作用的研究  汪长中 ，程惠娟，官　妍，王　艳，云　云 （安徽中医学院 中西医结合临床学院，安徽 合肥２３００３８） ［摘要］　目的：研究没食子酸对体外白念珠菌生物膜的影响。方法：采用ＸＴＴ减低法评价没食子酸对白念珠菌的生物膜 及黏附性的影响；镜下观察没食子酸对白念珠菌生物膜的形态学影响；细胞毒试验检测该药的毒副作用。结果：没食子酸抑 －１ －１ 制白念珠菌生物膜最低药物浓度ＳＭＩＣ ，ＳＭＩＣ分别是５００，１０００ｍｇ·Ｌ ；１００，１０００ｍｇ·Ｌ 的没食子酸对白念珠菌的早期 ５０ ８０ 黏附及菌丝生长有抑制作用；没食子酸对人细胞毒性较弱。结论：没食子酸对体外白念珠菌生物膜有较强的抑制作用。 ［关键词］　白念珠菌；生物膜；没食子酸 　　近年来，随着广谱抗生素、免疫抑制剂的广泛应 公司（批号ＢＭ１０４４１，纯度 ９９％）。 用，导管插管、腹膜透析、器官移植、肿瘤放化疗等的 １．３　培养基　ＲＰＭＩ１６４０培养基（ＧＩＢＣＯ公司）， 大量开展，以及艾滋病人的出现，免疫功能抑制人群 ＹＰＧ培养基、沙氏培养基依据文献［３］配制。 不断增多，以念珠菌尤其是白念珠菌为主的真菌感 １．４　试剂　ＸＴＴ［２，３ｂｉｓ（２ｍｅｔｈｏｘｙ４ｎｉｔｒｏ５ｓｕｌｆｏ 染发生率呈逐年上升趋势。但目前临床上常用的抗 ｐｈｅｎｙｌ）２Ｈｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ５ｃａｒｂｏｘａｎｉｌｉｄｅ］（加拿大ＢＢＩ 真菌药物很少有令人满意的疗效，其主要原因之一 公司），维生素 Ｋ３（美国Ａｌｅｘｉｓ公司），ＴｒｉｔｏｎＸ１００ 在于白念珠菌容易形成生物膜（ｂｉｏｆｉｌｍ）。生物膜形 （美国Ａｍｒｅｓｃｏ公司），丙酮（蚌埠化学试剂厂），均 成后，膜内的菌细胞能够逃逸抗生素的杀伤作用和 为分析纯。 机体免疫系统的清除，并成为潜在的感染源，从而造 １．５　仪器　３１８酶标仪（上海三科仪器有限公司）， 成感染的反复发作。鉴于现有的抗真菌药物或毒副 ９６孔微量培养板（美国Ｃｏｒｎｉｎｇ公司），ＣＫＸ４１３２型 作用大、或抗菌谱窄、或易产生耐药性，因此迫切需 倒置显微镜（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司）。 要新型有效药物，而从我国丰富的中药资源中发掘 ２　方法 出具有抗真菌生物被膜的中药不失为一项重要的举 ［３４］ ２．１　白念珠菌生物膜的制备 　将白念珠菌接种 措。本课题组近期研究发现，部分中药及有效成分 于ＹＰＧ培养基中，３５℃摇床过夜培养，收集菌体，用 具有较强抗白念珠菌生物膜的功效。本试验即探讨 ６ ＲＰＭＩ１６４０培养基稀释，调整菌液细胞密度为１×１０ 中药有效成分没食子酸对体外白念珠菌生物膜的作 个／ｍＬ。将１００ Ｌ菌悬液接种于９６孔微量培养板 μ 用，以期为中药治疗由白念珠菌生物膜引起的难治