牛初乳中乳铁蛋白的分离纯化与免疫功能检测 - 食品科学.pdf

208 2005, Vol. 26, No. 7 食品科学 营养卫生 牛初乳中乳铁蛋白的分离纯化 与免疫功能检测 1 2, 2 叶震敏 王志耕 * 余为一 (1.苏州大学医学院 江苏 苏州 2150072.安徽农业大学动物科技学院 安徽 合肥 230061) 摘 要 牛初乳经离心 盐析后获得乳铁蛋白粗提物 通过CM-Sephadex C50离子交换色谱和Heparin-Sepharose CL-6B亲和色谱纯化获得纯度分别为76.98%和92.75%的乳铁蛋白 经SDS检测乳铁蛋白存在分子质量分别 为76000Da和78000Da的两种异构体 免疫电泳说明提纯样品与乳铁蛋白标准品具有相同的免疫原性 小白鼠喂养 和免疫实验说明乳铁蛋白可提高机体免疫功能 关键词 初乳 乳铁蛋白 分离提纯 免疫功能 1 2, 2 WANG Zhi-geng* YU Wei-yi YE Zhen-min Abstract experiments. Key wordscolostrumslactoferrinisolation and purificationimmune function 中图分类号 S852.4 文献标识码 A 文章编号 乳铁蛋白(Lflactoferrin)是一种主要存在于大多数 初乳取自合肥奶牛场 CM-Sephadex C50树脂 哺乳动物乳汁中的铁结合性糖蛋白 它在增强机体免疫 Heparin-Sepharose CL-6B树脂购自Pharmacia公司 能力 调节机体生理状态平衡 改善胃肠功能 抗菌 AKTA-FPLC unicom3.21monosHR5/5高效液相色谱系 抗病毒等方面起着重要作用[1]乳铁蛋白已被广泛应用 统购自Pharmacia公司 中分子量标准蛋白来自上海生 于食品 医药 饲料 生化以及化妆品领域 作为 化所 乳铁蛋白标准品购自Sigma公司 弗氏佐剂自行 纯天然功能因子 其开发利用已引起人们的高度关注 制备 实验动物来源于安徽医科大学实验动物中心 [2]本文建立了实验室分离提纯具有生物学活性的较高 1.2方法 纯度乳铁蛋白的技术路线和方法 并对其提高机体体液 1.2.1粗提 免疫的活性进行了验证性研究 以期为高纯度乳铁蛋白 取中国荷斯坦奶牛产犊后24h内的牛初乳 4 下 工业化生产提供技术参考 4000g离心30min脱乳脂 调pH 至4.625下4000g离心30min去除酪蛋白后 用 1 材料与方法 42%饱和(NH4)2SO4盐析后2000g离心20min 1.1材料 取乳清即为乳铁蛋白粗提物 收稿日期 2004-10-27 通讯作者 * 基金项目 安徽省 十五 农产品加工重大专项 作者简介 叶震敏(1977-)博士生 主要从事肿瘤免疫研究 营养卫生 食品科学 2005, Vol. 26, No. 7 209 1.2.2离子交换色谱 将透析的乳清样品加入平衡过的2 33cm CM- Sephadex C50离子交换柱 分别用pH8.0含0 0.30. 50.7mol/LNaCl的0.05mol/L磷酸钾缓冲液(PBS)以60ml/ h流速分段洗脱 根据峰值