胚柄特异性表达顺式元件结合蛋白酵母单杂交文库的构建construction .pdf

农业生物技术学报，  年， 第  卷， 第  期， 第  页  2011 19 5 953~959 Journal ofAgriculturalBiotechnology,2011,Vol.19,No.5,953~959  研究资源  Resources  胚柄特异性表达顺式元件结合蛋白酵母单杂交文库的构建 宋国琦 1,2  王兴军 1,2 *  赵传志 1,2  夏晗 1,2  1 2 山东省农业科学院高新技术研究中心， 山东省作物与畜禽品种改良生物技术重点实验室； 农业部黄淮海作物遗传改良与生物技术重点开发 实验室， 济南 250100  * xingjunw@  通讯作者，  摘 要 旨在构建酵母单杂交文库用于筛选与胚柄特异基因 G564 启动子顺式元件结合的转录因子。本研 究根据植物胚柄特异表达基因 G564 启动子关键序列 合成了  次串联重复序列， 并与报告 (GAAAAGCGAA) 5  质粒  连接构建诱饵载体  G564 5A ； 以纯化的拟南芥 A rabidop sis thaliana 幼嫩种子 为 pHIS2.1  pHIS2.1­ ­ ( ) mRNA  模板， 合成  TM 芋和  芋锚定末端  ； 并将  与线性化融合表达载体  SMART  CDS dscDNA dscDNA  pGADT7­Rec2  以及诱饵载体  G564 5A 共转化到酵母  ， 构建酵母单杂交文库。文库的共转化效率为  伊   5  pHIS2.1­ ­ Y187 5.53 10  滋  。对文库中的阳性克隆进行测序， 获得  条可读序列。对其进行基因功能注释并进一步分析基因的 cfu/ g 117  功能发现， 具有  结合功能的蛋白  个， 具有蛋白质结合功能的蛋白  个。上述  个蛋白包括  DNA 14  8  22  TATA  结合蛋白  ， 支架结构相关区 结合蛋白， 胚珠发育蛋白，  结合因子  ， 组蛋 1(TBP1) (SAR)DNA­  G ­box  1(GBF1) 白  等。本研究为分离和克隆胚柄中特异表达的转录因子提供了候选基因。 H3  关键词 胚柄特异基因， 顺式元件， 酵母单杂交  Construction ofYeast One