核酸检测技术在酶联免疫吸附法漏检HIV和HBV血样筛查中的应用.pdfVIP

· 964 · 国际检验医学杂志2012年4月第33卷第8期 IntJLabMed，April2012，Vo1．33，No．8 · 检验技术与方法 · 核酸检测技术在酶联免疫吸附法漏检 HIV和 HBV血样筛查中的应用 余 谨，毕 昊，陆华新，王先广，赵 磊，沈 钢 (湖北省武汉市血液中心 43OO33) 摘 要 ：目的 应用核酸检测 (NAT)技术筛查经两遍酶联免疫 吸 附(ELISA)法检测各项指标均为 阴性 的无偿献血者的标 本 。方法 将 ELISA 法检测 的阴性标本采用六混样用两种试剂进行平行核酸检测，在检测 出阳性标本后 ，也用两种试剂对其拆 分进行单管核酸检测 。结果 4879例 ELISA 法检测呈阴性 的标本中，核酸检测 出1例 HIV 阳性样本 ，6例 HBV 阳性样本。结 论 开展核酸检测可 以提高临床用血质量 ，为临床安全用血提供强力有保 障。 关键词 ：HIV； 肝炎病毒 ，乙型 ； 核酸检测； 酶联免疫吸 附测定 DOI：10．3969／J．issn．1673—4130．20l2．08．033 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673—4130(2Ol2)08—0964—02 核酸检测 (nucleicacidtesting，NAT)技术不仅能检测 出 后，用全 自动酶免分析仪对 HBsAg、抗一HCV和抗一HIV用两 窗 口期 乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)和 HIV感 种不 同厂家的试剂在两 台仪器上平行进行两次 EusA法检 染 ，还可 以避免病毒变异、免疫沉默性感染等造成 的漏检 ，降低 测 ，OD值分别为 0．049和 0．003，结果判定均为 阴性 。NAT HBV、HCV和 HIV经血液传播 的风险，弥补酶联免疫 吸 附 检测确定该标本为 HIV 阳性后 ，再次从血袋取标本用两种试 (ELSA)方法的不足E123。 剂同时重做 ，0D值为 0．038和 0．005，仍然判定为 ELISA检 1 资料与方法 测阴性 。 1．1 一般资料 2011年 7月至今 留取的该 中心无偿献血者 2．2 ELIsA法漏检 HIV标本采用 NAT六混样检测结果 经两遍 ElISA法检测各项指标均合格 的血样本 4879例 。血 采用 CobasTaqScreenMPX试剂在六混样 的 PCR扩增 曲线 液采集后置于 NAT专用分离胶试管保存 ，采集后 4h内3000 中，在第 19．2个循环时荧光探针就检测 出了靶标核酸片段 。 r／min离心 20min，置于4℃保存 。待两遍 ELISA法检测各项 但是其 内置控并未扩增 出来 ，考虑到该批次检测其他阴性样本 指标完成后 ，剔除不合格标本 ，选取各项指标均合格 的样本于 均扩增出 内置控 ，唯独此 阳性样本未扩增 出内置控 ，推测是该 24h内进行检测 。 样本病毒载量浓度过高，抑制其反应 。采用 CobasTaqScreen 1．2 仪器与试剂 HAMIIT0NMicrolabSTAR(IVD)混样 MPXV2试剂在六混样 的PCR扩增 曲线中，在第 21．8个循环 仪 (瑞 士)；CobasAmpliPrep+CobasTaqMan(美 国罗 氏公 时荧光 探针 就检测 出 了靶 标核 酸片段 。CobasTaqScreen 司)；低温离心机 (德 国Thermo)；CobasTaqScreenMPX试剂 MPXV2试剂 (第 2代试剂)采用多荧光探针技术 ，CH1为 盒 (美 国罗 氏公司)；CobasTagscreen洗液 (美 国罗 氏公司)； HIV，CH4为内置控 ，即使在六混样检测 中相较于 内置控多荧 CobasTaqScreenMPX对 照试 剂 盒 (美 国罗 氏公 司)；Cobas 光探针也体现出了较好的灵敏度 ，同时内置控在高浓度抑制扩 TagscreenMPXV2试剂盒 (美 国罗 氏公司)；CobasTaqScreen 增方面也有所改进 。 MPxV2对照试剂盒 (美 国罗 氏公司)。 2