琼脂凝胶电泳(fspi 体外酶解pcr21 topo转化株).ppt

写作研讨会 #3 结果和讨论 下面幻灯片上的例子都取自真实原文 这些幻灯片列举了学生们在起草他们论文的结果和讨论部分所经常遇到的问题 在评论每个例子的时候，问一下自己是否你的论文也犯有相同的毛病。 你该怎样改变你的写作来避免这些毛病？ 从概念上区分测试结果 从概念上区分测试结果 不要过度使用人称代词 避免使用实验俚语 避免使用实验俚语 警惕模糊的解释 警惕模糊的解释 更多的含义模糊的陈述 更多的含义模糊的陈述 去除不必要的凝胶带 去除不必要的凝胶带 去除不必要的凝胶带 图的标题不用列表 图的标题不用列表 对质粒命名只有在描述了其成功的测试之后才能给出 对质粒命名只有在描述了其成功的测试之后才能给出 只有在成功的测试之后才能对质粒命名 删除不必要的细节 删除不必要的细节 删除不必要的细节 删除不必要的细节 开始讨论 开始讨论 引用参考文献 引用参考文献 “讨论”作为“实际陈述” 结束讨论 结束讨论 * 转录融合测试分析 进行GUS测试是为了揭示启动子是否有转录活性，如果有的话，测量其在不同的菌株中的活力 为进行GUS测试，将取自…基因的假定的启动子联结到pAL280表达载体上进行建构 测试…启动子的活力 为确定…启动子在AN12的野生型和突变型中的活力，我们进行了一次GUS测试 GUS测试是一种工具而不是一个概念 GUS =酶 gusA =基因 这个表达更贴切 但它在内容上跑题了 测试…启动子的活力 为确定…启动子在AN12的野生型和突变型中的活力，我们进行了一次转录融合测试。在测试中，来自…基因的启动子和b-葡(萄)糖苷酸酶报道基因(gusA)的编码序列融合在一起。 转录融合测试分析 在转录融合测试中，假定的启动子和b-葡(萄)糖苷酸酶报道基因(gusA)的开放阅读框融合在一起。 以这种方式测量GUS 活力将可以揭示启动子是否有转录活性，如果有的话，还可以测量其在不同菌株中的活力。 为进行这个测试，将取自…基因的假定的启动子联接到pAL280表达载体上进行建构 为获得抗庆大霉素的转座子，我们用…从 pMSR1 中分离出我们的转座子。 为获得抗庆大霉素的转座子，我们用…从 pMSR1 中分离出这种转座子。 eek! 呀 为了确定转座子是否真的随机插入了基因，对所有菌株的质粒拯救都进行测序 啊? 为了确定转座子是否真的随机插入了基因，我们对插入了转座子的基因组进行了测序。我们首先通过质粒拯救过程恢复了带有部分染色体组DNA的转座子（见材料和方法）。以这种方式恢复的染色体组DNA 的序列显示… 质粒也用转座子先前的引物进行测序，与同种的已知序列相比，上游区是BLAST 嗯? 什么的上游？ 质粒也用转座子先前的引物进行测序，目标转座子以上的序列通过BLAST分析 (Altschul et al., 1990) 测得，以确定在基因库中是否有与他们类似的已知序列 …质粒通过和nimB and ORF5468基因进行同源重组整合到染色体组中。真正的潜在的剔出繁殖实验表明在整合后的质粒 丢失比率非常低。 我应当已经知道这是什么意思吗？ …质粒通过和nimB and ORF5468基因进行同源重组整合到染色体组中。真正的潜在剔出繁殖实验表明在整合后的质粒丢失比率非常低。 要么在材料和方法中全面解释“真正的繁殖实验” ，要么在这儿包括更多的细节 …质粒通过和nimB and ORF5468基因进行同源重组整合到染色体组中。 我们通过一次真正的繁殖实验来测试整合质粒 的稳定性。在这个实验中，重组细胞在不适温度和缺少抗生素选择的条件下培养大约10代。然后将从这个培养物中取得的等份试样接种到含选择介质的平板（含5 mg/L庆大霉素的 LB）或不含选择介质的平板（LB）上。在选择平板和非选择平板上的菌落数量比反映了保留有完整质粒 的比例。这个潜在的剔出的实验表明… 使用（转座子）成功地培育出转化株。在最初的几次转化尝试中，阳性对照的产量在10到20个菌落之间，而…阴性对照的产量为0。 什么是阳性对照？ 你控制的条件是什么？ 使用（转座子）成功地培育出转化株。在最初的几次转化尝试中，正调控的产量在10到20个菌落之间，而…负调控的产量为0。 … 使用（转座子）成功地培育出转化株。 为了测试细胞是否能吸收外源DNA，在电穿孔的正极用pEP2 或 pJP10 质粒来代替转座子对正调控进行电穿孔，负调控只运载细胞。在最初的几次转化尝试中，正调控的产量在10到20个菌落之间，而…负调控的产量为0。 图4通过HindIII 和Pst1 酶解后对S-34, S-42 的鉴定。 带1包含了1kb的DNA带。带3和带4包含了S-34质粒拯救，这表明在转座子上预计的1.5kb带分别在两个限制酶间。同样的，带5和带6包含了S-