罗非鱼胰蛋白酶ⅰmrna 克隆与分析黎军胜1 李建林2 - 水生生物学报.pdf

第 30 卷 第 2 期 水 生 生 物 学 报 Vol . 3 0 ,No . 2 2 0 0 6 年 3 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA Mar . , 2 0 0 　6 罗非鱼胰蛋白酶 ⅠmRNA 克隆与分析 1 2 2 黎军胜 　李建林 　吴婷婷 ( 1 南京农业大学食品科技学院 ,南京 　210095 ; 2 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 ,无锡 　214081) ( ) ( ) 摘要 :应用 3′/ 5′RACE 方法对尼罗罗非鱼 Oreochromis niloticus 和奥利亚 Oreochromis aureus 罗非鱼胰蛋白酶 ⅠmR NA 进行了克隆和测序 ,序列分析表明 ,尼罗罗非鱼和奥利亚罗非鱼胰蛋 白酶 ⅠmRNA 序列全长分别为 863bp 和 858bp ,序列中均含有 738 个核苷酸组成的开放阅读框 ,编码长度为 245 个氨基酸残基的胰蛋白酶 Ⅰ。胰蛋白酶 Ⅰ ( 氨基末端均存在信号肽和激活肽序列 ,序列中均具有与催化活性必须的高度保守的催化三联体氨基酸残基 His 、 Asp 、Ser) 和构成二硫键的 12 个半胱氨酸残基 , 以及决定底物特异性的保守性氨基酸残基即天冬氨酸残基和 S1 结 ( ) ( ) ( ) ( 合袋 。南极鱼 Patanotothenia magellanica 、大西洋鲑 S almo salar 、日本鲽 Paralichthys olivaceus 、大西洋鳕 Gadus morhua) 、牛和人类胰蛋白酶 mRNA 序列以及氨基酸序列与奥利亚罗非鱼相比较同源性分别为 583 % —725 %和 633 % —761 % ,与尼罗罗非鱼相比较同源性分别为 591 % —731 %和 636 % —756 % 。奥利亚罗非鱼和尼罗罗非 鱼胰蛋白酶 mRNA 序列以及氨基酸序列同源性分别为 962 %和 992 % 。 关键词 :罗非鱼 ;胰蛋白酶 ;cDNA ;克隆 ( ) 中图分类号 :S9631 　　文献标识码 :A 　　文章编号 2006 　　胰蛋白酶是动物消化分解蛋白质的主要酶类 , 1 　材料与方法 也是其他几种蛋白酶的激活剂[3 ] ,对于动物的消化 吸收功能具有重要作用 。有研究发现 ,鱼类胰蛋白 11 　材料 　Trizol Reagent 、SuperScript OneStep RT 酶的催化效率远高于哺乳动物[ 1 ,2 ] ,但原因和机制 PCR with Platinum Taq 购 自 Invitrogen 公司 , RTPCR 不清楚 。多年来众多研究者对哺乳动物的胰蛋白酶 Kit 、TdT 、RNase H 均购 自 Takara 公