牛分枝杆菌m pb83基因的原核表达及免疫活性分析3.pdf

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 2005, 25 ( 11) : 76 ～80 牛分枝杆菌 M PB83基因的原核表达及 免疫活性分析 1, 2 1 1 1 3 4 1 1 3 张秀华 　刘思国 　王春来 　郭设平 　郭 　洋 　邵美丽 　宫 　强 　彭永刚 　沈国顺 ( 1 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 　哈尔滨 　15000 1　2 中国农业科学院特产研究所 　吉林 　132 109) ( 3 沈阳农业大学畜牧兽医学院　沈阳　11016 1　 4 东北农业大学动物医学院　哈尔滨 　150030) ( ) 摘要 　利用 PCR 技术 , 以牛型分枝杆菌 M . bovis V allee菌株的全基因组 DNA 为模板 ,扩增出了 一条 600bp 的 M PB 83 基因片段 ,将其克隆至 pMD 18T载体中 ,经核苷酸序列测定确证后 , Kp n I/ E coR I双酶切 ,然后亚克隆到原核表达载体 p ET30a 的相同酶切位点 ,构建表达质粒 p ETM PB 83, ( ) 将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌 BL2 1 D E3 , IPTG诱导后 SD SPA GE检测表达情况 ,重组质粒 p ETM PB 83在 30kD a处有一特异表达带 ,与预计大小相符 。经 N i柱纯化后 ,W e stern b lot检测纯 ( ) 化蛋白具有免疫活性 ,用纯化的该蛋白进行动物 兔 接种制备抗血清 ,用 W e stern b lot和 EL ISA 检测该抗血清的效价和特异性 ,结果表明特异性较好 。 关键词 　牛分枝杆菌 　M PB 83基因　原核表达 　W e stern b lot　抗血清 　EL ISA ( ) 　　牛结核病为人畜共患传染病 , 不仅严重影响畜牧 定所 ; pMD 18T购 自宝生物工程 大连 有限公司;质粒 业的持续健康发展 ,更严重威胁着人类的身心健康 [ 1 ] , p ET30a,大肠杆菌感受态 BL2 1 ( D E3 ) 均 由本实验室 感染人并能导致肺炎和肺外感染 [ 2 ] 。 保存 。 ( ) 1. 2　酶及试剂盒 　　牛分枝杆菌 M y cobacterium bovis 是引起牛结核病 ( 的主要病原体 , 它有多种抗原成分 , 而 M PB 83 是牛分 　　限制性核酸 内切酶 Kp n I、E coR I, 连接酶 Solu sion ) ( ) 枝杆菌表面相关的分泌型脂蛋白,在牛分枝杆菌中高 Ⅰ购 自宝生物工程 大连 有限公司 ; IPTG和 DNA 回 水平表达 ,但在结核分枝杆菌中很少表达 ,至今尚未证 收试剂盒购 自上海华舜生