ph 值敏感相分离特性的蛋白质酶解试剂研究 - 分析化学.pdf

39 (FENXI HUAXUE) 1 第 卷 分析化学 研究报告 第 期 2011 1 Chinese Journal of Analytical Chemistry 12 ～ 16 年 月 DOI :10． 3724 / SP． J． 1096． 2011． 00012 pH 值敏感相分离特性的蛋白质酶解试剂研究 吴蓓蓓 商云岭 邬建敏* ( ， 310058) 浙江大学化学系微分析系统研究所 杭州 DEC / NHS (Trypsin ) pH (CS) 。 摘 要 通过 偶联反应将胰蛋白酶 连接到具有 值敏感性的壳聚糖 链上 Trypsin-CS CS pH Trypsin 。 ， 偶联物保留了 的 值敏感相分离特性及 的酶催化活性 浊度滴定实验表明 此偶联 pH (CPSP) ， CS 。 物的临界相分离 值 仍保持在偏中性范围内 并且随 的分子量降低而略有上升 这种偏中性的 CPSP 。 8 × 104 CS Trypsin 30 值有利于相分离循环过程中保持酶的催化活性 分子量为 的 与 的偶联物在存放 d 69% 。 6 79% 。Trypsin-CS 后可保留 的初始酶活性 偶联物经过 次循环使用后的残余活性为初始活性的 偶 CPSP ， CPSP 。HPLC 联物可在低于 值的条件下对蛋白质进行均相酶解 并在高于 值时从催化体系中分离出来 ，Trypsin-CS Trypsin ， Trypsin 肽谱分析表明 偶联物中 的自降解被显著抑制 因而有效消除了 自降解肽段对肽谱 分析的干扰。 pH ; ; ; ; 关键词 值敏感高分子 胰蛋白酶 偶联 酶活性 肽谱分析 1 引 言 pH pH 。 值敏感高分子材料或凝胶是一种能随 值的变化而产生体积或形态改变的材料 这种变化 ， 。 ， pH 是基于分子水平及大分子水平的刺激响应性 因而具有可重现特性 通常 具有 值响应性的高分子 材料中含有弱酸性或弱碱性基团。 pH ， ， 随着介质 值的改变 这些基团发生可逆的电离及去电离过程 导