一种具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白的纯化与n端氨基酸序列分析.pdf

TraditionalandHerbal ·1320． 中草黄Chinese Drugs第39卷第9期2008年9,El 一种具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白的纯化与 N端氨基酸序列分析 王厚伟 (山东中医药大学药学院，山东济南250355) 摘 要：目的 分离纯化具有胰蛋白酶抑制活性的半夏蛋白，分析其对胰蛋白酶的抑制活性、抑制机制与N端氨基 酸序列。方法 采用以胰蛋白酶为配体的亲和色谱和SephadexG一50凝胶过滤法，从半夏蛋白粗提液的40％ man降解法分析其N一端氨基酸序列。结果纯化的活性半夏蛋白经SDS检测呈现单一条带，相对分子质 059．012 量为1．4×10‘I比活力为1 U／mg，活力回收率为24．40％I对胰蛋白酶的质量抑制比为1，4．72，抑制常 数(Ki)为7．17×101mol／L；其N端前6个氨基酸残基顺序为DPVVDG。结论该活性半夏蛋白是一种丝氨酸蛋 白酶抑制剂，为胰蛋白酶的竞争性抑制剂。 关键词：半夏蛋白；胰蛋白酶抑制剂；分离纯化IN端氨基酸序列 中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1320—04 Purificationofa with from Pinelliae proteintrypsin—inhibitingactivityRhizoma and ofitsN—terminalaminoacid analysis sequence WANGHou—wei of ofTraditionalChinese (College University Medicine，Jinan250355，China) Pharmacy，Shandong To a RhizomaPinelliae its and purify protein，determine Abstract：Objective inhibitingactivity mechanismto itsN—terminalaminoacid ActiveRhizoma trypsin，andanalyze sequence．Methods Pinelliae was fromthe ofthecrudeextracted from proteinpurified 40％(NH‘)2SO‘sediment protein and RhizomaPinelliae of CL4B filtrationof byaffinitychromatographytrypsin--Sepharosegel Sephadex SDS—PAGEwasusedfor the ofthe RhizomaPinelliae G-50；12％of purity purified protein