奶粉中双氰胺的检测-spe-hplc法.doc

奶粉中双氰胺的检测方法 （HPLC-UV和HPLC-MS/MS法） 北京时间1月25日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺，缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。 本文采用天津博纳艾杰尔科技的Cleanert? MAS-QuChERS-双氰胺净化管（货号：MS-DI5001）和Venusil? HILIC液相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。 表1 双氰胺样品信息 名称 结构式 分子量 CAS 双氰胺 84.08 461-58-5 实验部分 仪器和试剂 高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。 双氰胺标准品，Cleanert? MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil? HILIC液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。 实验方法 提取、净化 称取1g试样于50mL具塞离心管中，加入2mL水溶解后，加乙腈定容至10mL，超声10min，8000r/min离心5min，取2mL上清液加Cleanert? MAS-QuChERS-双氰胺净化管中，，涡旋0.5min，8000r/min离心5min，取上清液过0.22μm滤膜，待测。 HPLC法： 色谱条件： 色谱柱：Venusil? HILIC 5μm 100? 4.6*250mm； ；B：乙腈； A：B=10:90； 检测波长：220nm；进样量：10μl；柱温：30℃；流速：1mL/min。 实验结果： 线性关系和检出限 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液； 分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为0.1μg/mL，0.5μg/mL，1.0μg/mL，2.0μg/mL，5.0μg/mL和10.0μg/mL的标准溶液，按照上述色谱条件，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表2： 表2 双氰胺线性方程和定量限（HPLC法） 名称 保留时间 线性方程 相关系数 最低定量限（S/N=10） 双氰胺 4.92min Y=116.44X+3.2699 0.9997 0.1μg/ml 检测方法稳定性考察 选用10.0μg/mL的标准溶液连续进样6针，计算其保留时间和峰面积的RSD值，结果见表3： 表3 检测方法定性和定量稳定性考察考察（HPLC法） 标号 保留时间，min 峰面积 1 4.930 1061.7 2 4.933 1072.2 3 4.930 1064.4 4 4.929 1079.7 5 4.930 1067.3 6 4.934 1073.6 RSD，% 0.04 0.62 准确度和精密度 选取市售某品牌奶粉试样，进行添加回收实验，结果见表4 表4 10μg/g添加回收实验结果（HPLC法） 平行1，% 平行2，% 平行3，% 平均值，% RSD，% 98.6 88.4 89.8 92.3 5.99 LC-MS/MS法： 色谱条件： 色谱柱：Venusil? HILIC 5μm 100? 2.1*150mm； 流动相：A：0.5mmol/L乙酸铵（pH=4.0） B：乙腈 A：B=10:90 进样量：10μL； 柱温：30℃； 流速：0.2 mL/min。 质谱条件 质谱仪：API 4000+； 离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：多反应监测； CAD：8.00； CUR：10.00； GS1：60.00； GS2：50.00； IS：5500.00； TEM：500.00。 表5 双氰胺质谱信息 药物名称 监测离子对 DP EP CE CXP 双氰胺 85/68 71 10 41 6 85/43 71 10 41 6 注：带“____”的监测离子对为定量离子对。 实验结果 线性关系和检出限 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，作为标准贮备液； 分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为5ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，50ng/mL，100ng/mL和500ng/mL的标准溶液，按照上述液质方法，依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见下表6： 表6 双氰胺线性方程和定量限（LC-MS/MS法） 名称 保留时间 线性方程 相关系数 最低定量限（S/N=10） 双氰胺 3.15min Y=8777.2X+7435.9 0.9993 5ng/mL 检测方法稳定性考察 选用