睫状神经营养因子对培养大鼠视网膜神经节细胞的作用及其机理的研究.pdfVIP

睫状神经营养因子对培养大鼠视网膜神经节 细胞的作用及其机理的研究 摘 要 目的：近年来，大量的研究显示青光眼视网膜神经节细胞死亡的主要方 式是凋亡。随着对青光眼病理机制研究的深入，其治疗也由单一的减低眼内 压转为在降低眼压的同时加强神经功能的保护。睫状神经营养因子(ciliary factor CNTF)可诱导多种神经细胞分化，减少神经细胞凋亡和 neurotrophic 促进细胞再生，有实验证实CNTF能促进视网膜神经节细胞(RC-Cs)存活， 但其促RGCs存活的机理尚不清楚。此外CNTF是否能减少RGCs的凋亡目 前亦未见文献报道。本研究通过体外实验观察睫状神经营养因子对培养大鼠 视网膜神经节细胞的作用并对其作用机理进行研究。 ／方法：本实验使用0．05％胰蛋白酶对出生后2~3天的Wistar大鼠视网 膜迸短消化从而获得视网膜神经节细胞，通过Thy-1单克隆抗体免疫细胞化 学对培养的RGCS进行鉴定，TUNEL法检测凋亡细胞。实验分四组，对照 的存活情况，记录存活时间，将培养第l天、第3天和第5天的RGCs行 MTT自动比色法测量OD值以检测存活细胞数，流式细胞仪检测培养3天 blot检测 的RGCs凋亡率，其中20ng．mr‘CNTF组在培养第3天行Western 视网膜神经节细胞bcl-2蛋白表达。 结果：免疫细胞化学显示在培养第1天、第4天，90％以上的细胞染色 阳性。培养的视网膜神经节细胞存在TUNEL阳性细胞。CNTF组的细胞存 活时间比对照组长20天；在培养的第l天，cNrF组与对照组相比细胞数 无显著差异，在培养的第3天、第5天，cNTF组能显著提高存活的R(论s CNTF在 培养第3天显著提高视网膜神经节细胞bcl-2 th表达(PO．05)。少 结论：本实验方法获得较纯化的视网膜神经节细胞，能满足进一步的实 验需要：CNTF能促进视网膜神经节细胞的存活，减少视网膜神经节细胞凋 亡；而CNTF抗凋亡的作用可能与bcl．2基因表达升高有关。 关键词：视网膜神经节细胞； 睫状神经营养因子； 凋t影 B细胞淋巴瘤歹白血病基因2； 细胞培数 V of Factor011Rat andMechanisms Effects Ciliary Neurotrophic inVitro Retinal Cells Ganglion Abstract that isthe WaS in studies many apoptosis reported Purpose：Recently，it deathofretinal cells(RGCs)of the mainlyway ganglion glaucoma．Following