第二步：拆分蛋白质分子的多肽链和二硫键 - 河北科技大学.docVIP

第 7 次课 2 学时 上次课复习： 提问练习题 本次课题（或教材章节题目）：第三章　蛋白质　第一节　氨基酸（2） 第三节　肽 学要求： 1.掌握 Sanger试剂和Edman反应；侧链巯基的化学反应； 了解其它的化学反应； 2.掌握氨基酸的光学活性和光谱性质； 3.掌握氨基酸混合物的分离原理及方法：纸层析、柱层析、离子交换层析 重 点： Sanger试剂和Edman反应；侧链巯基的化学反应；氨基酸紫外吸收；纸层析和离子交换层析分离分离氨基酸的原理； 难 点： 纸层析和离子交换层析分离分离氨基酸的原理 教学手段及教具：课堂讲授与PowerPoint演示相结合。 讲授内容及时间分配： 复习：5分 第一节　氨基酸 四、氨基酸的化学反应（15分） 五、氨基酸的光学活性和光谱性质（15分） 六、氨基酸混合物的分析分离（20分） 第三节　肽（30分） 一、肽 二、生物活性肽 小结：5分 课后作业 1.α-氨基酸的烃基化反应常用的二种试剂是？氨基酸自动分析仪依据哪种反应原理设计？ 2.α-氨基酸的茚三酮反应呈现的颜色是否都一样？ 3.米伦反应、坂口反应和 Pauly反应是哪些氨基酸侧链的反应？ 4.半胱氨酸的巯基都有哪些反应？常用的打开二硫键的氧化剂和还原剂是什么？ 5.哪三种氨基酸在280nm紫外光下有吸收峰？原因是？紫外吸收法测定蛋白质浓度的理论依据是？ 6.氨基酸纸层析、离子交换层析的原理？ 肽键及肽键的特点 2.天然生物活性肽及结构特点 3.谷胱苷肽结构特点及生物功能、抗菌肽 4.蛋白质一级结构及序列测定步骤 5.二硫键的打开方法及肽链分离方法 书后79页习题：1，2　 参考资料 《蛋白质分子基础》高教出版社　第二版　陶慰孙等 《》出版社　　第二版 注：本页为每次课教案首页 第四章 蛋白质化学(protein) 第一节 　概述 第二节 　蛋白质的基本单位—氨基酸 第三节 　肽 第四节 　蛋白质的分子结构 第五节 　蛋白质的性质 第六节 　蛋白质及氨基酸的分离纯化与测定 第三节　肽 一、肽 二、生物活性肽 一、肽 肽是氨基酸的线性聚合物。 肽的获得 1.肽的结构 肽键的特点 肽平面、肽单位、二面角 多肽中的二硫键 2.肽与氨基酸的性质区别 肽的酸碱性质 氨基酸无双缩脲反应，肽有 天然存在的重要多肽 以蛋白质形式存在: 以天然活性肽形式存在： 二、生物活性肽(Natural peptide) 1.谷胱甘肽：γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸 谷胱甘肽重要的生物功能 2.神经肽 主要存在于中枢神经系统的一类活性肽。 ①脑啡肽（五肽） ②内啡肽 3.抗菌肽(是一种抗生素) ①青霉素 ②短杆菌肽（10肽） ③放线菌素 其它活性肽 肽的应用及发展 第四节 蛋白质的分子结构 构象（conformation） 蛋白质结构的不同组织层次（20世纪50年代） 一、蛋白质的一级结构（平面结构、化学结构、共价结构 ） 1.概念： 书写方式：Ala.Lys.Gly LSTI 2.一级结构的测定（测序） 步骤 第一步：测定蛋白质分子中多肽链的数目 第二步：拆分蛋白质分子的多肽链和二硫键 借助非共价相互作用缔合的 通过共价二硫桥（－S－S－）交联的肽链 分离、纯化多肽链：电泳、层析等方法。 ①还原法：二硫键的断裂 为防止巯基重新氧化，可用碘乙酸、碘乙酰胺等使其烷化 ②氧化法：二硫键的断裂 二硫键用过甲酸氧化为磺酸基而拆开 第三步：分析每一多肽链的氨基酸组成 第四步：测定多肽链的氨基酸序列 N－末端氨基酸测定 C－末端分析 多肽链的部分裂解和肽段混合物的分离纯化 （1）肽链末端分析 ① N-末端分析 二硝基氟苯法（FDNB法） 二甲基氨基萘磺酰氯法（DNS-Cl法） 异硫氰酸苯酯法（Edman法） 氨肽酶法 ②C－末端分析 肼解法 羧肽酶法 ③多肽链部分裂解和肽段混合物的分离纯化 要求：选用专一性强的、断裂点少的、反应产率高的蛋白水解酶或化学试剂进行有控制的裂解。后将所得混合物进行分离纯化。经N未端和C未端测定，确定出每一肽段的序列。 酶解法（表现出专一性） 化学法 第五步：确定肽段在多肽链中的次序 所得资料： N－末端残基 H　C－末端残基　S 第一套肽段　OUS　PS　EOVE　RLA　HOWT 第二套肽段　SEO　WTOU　VERL　APS　 HO 借助重叠肽确定肽段次序： 　　　　HOWT OUS EOVERLAPS 第六步：确定原多肽链中二硫键的位置 采用胃蛋白酶：专一性低，切点多。肽段比较小，分离、鉴定比较容易。作用pH在酸性范围。 肽段混合物进行的对角线电泳 对角线电泳 巯基的保护 例：有一个A肽？ ①酸水解得到：Ala、Arg、Ser、Glu、　Phe、Met； ②当A肽与FDNB试剂反