广州南沙湿地鸟类群落组成、多样性和保护策略 - 生态环境学报.docVIP

浙江沿海藻类共生细菌的生理生化特性研究 苏秀榕1，秦松2，骆其君1，刘乐然1，刘昭能1 1. 宁波大学生命科学与生物工程学院，浙江 宁波 315211；2. 中国科学院海洋研究所开放实验室，山东 青岛 260021 摘要：利用梯度稀释法，从浙江象山、朱家尖等海域所采集的几种海藻中分离出海洋细菌50株，运用杯碟法研究了其胞外代谢产物活性，结果表明，100%的菌株含有胶原蛋白酶、淀粉酶，96%的菌株含有酪蛋白酶，70%的菌株含有酯酶，30%的菌株含有卵磷脂酶、脲酶，还有6%含微量的壳多糖水解酶。同时将这50株菌分别培养在高温（55 ℃）、高盐（质量分数5.5×10-2）、酸性（pH 4.5）环境中，同样对胞外产物活性进行分析。结果显示：外界环境胁迫下，水解明胶、淀粉、酪蛋白和吐温的酶活性仍然存在，但活性有了很大的变化。因胶原蛋白酶、酪蛋白酶能分解胶原蛋白等成分，淀粉酶具分解淀粉、糖原的作用，因此，这些细菌的产物对其他生物有毒害作用，可能是致病菌，也可能对已知致病菌起抑制、破坏作用。本研究为寻找海洋活性先导化合物，为海洋药物的开发等提供了广阔的前景。 关键词：海藻；海洋细菌；胞外代谢产物；生理生化特性 中图分类号：Q178.531 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2005）02-0239-03海洋生物之间除了捕食者—被捕食者之间的食物关系外，不同种类之间还有一些关系密切程度不同的组合。其组合关系有的是对双方无害，而更多的情况是对双方或其中一方有利，这种两个不同生物种之间的各种组合关系总称为共生现象（symbiosis）。生物的共生关系无论在陆地上或在海洋中均有存在，不过，海洋生物的共生现象更多、关系更密切。共生现象的类别有共栖（commensalism）、互利（mutualism）、寄生（parasitism）、偏害（amensalism）、原始合作（protocoperation）等几类。具体可分为藻类—藻类之间的共生关系；藻类—动物之间的共生关系；动物—动物之间的共生关系；生物之间的生化相互关系[1]。大型海藻生活在理想的生长环境中，光合作用即不受脱水作用的限制，也不受过度暴晒的影响，波浪作用使其叶片能最大限度地延伸在有充足光照条件下，并加速营养物质吸收，因此生长速度最快。这些藻类提供了藻类生物群落的“框架”，叶片表面为很多附着生物提供了生活空间，这种空间的异质性和高度多样化的生境，支持着各种消费者的生活。本文研究了与13种大型藻类共存的微生物种类及它们之间的生化关系，旨在从中发现一些具有生物活性的先导化合物。 1 材料和方法 1.1 材料 于2002年7月中旬，从浙江象山、朱家尖海域采集海藻13种，分别是大石花菜(Gelidium pacificum Okam)、角叉菜(Chondrus ocellatus Holm)、纵胞藻(Centroceras clavulatum (Ag.) Mont)、繁枝蜈蚣藻(Grateloupia ramosissima Okam)、剑叶蜈蚣藻(Grateloupia okamurai Yamada)、叉枝藻(Gymnogongrus flabelliformis Harv)、拟厚膜藻（Pachymeniopsis elliptica (Holm) Yamada）、厚膜藻(Pachymenia carnosa J.Ag)、羊栖菜(Sargassum fusiforme (Harv.) Setch)、海黍子(Sargassum Kjellmanianum Yendo)、鼠尾藻(Sargassum thunbergii (Mert)脂购于O’Kuntze)、孔石莼（Ulva pertusa Kjellm）、刺松藻(Codium fragile （Sur.）Hariot)。营养琼杭州微生物试剂有限公司，改良后的高氏固体培养基由实验室自行配置。 1.2 方法 1.2.1 菌的分离与纯化 在无菌条件下，将藻体分别用无菌海水漂洗2次，用无菌剪刀剪成0.5 cm×0.5 cm碎片，分别在细菌固体培养基和高氏固体培养基上涂布后，室温培养7 d，观察、记录。挑取单菌落接种于灭菌后的细菌液体培养基中，室温培养48 h。8000 r/min 离心10 min，上清液经孔径0.45 μm的无菌纤维素膜过滤，滤液置4℃冰箱备用。 1.2.2 极端环境的培养 将在液体培养基中活化后的50株菌，分别接种在高盐（质量分数5.5×10-2）、高酸（pH 4.5）、高温（50 ℃）培养120 h后检测代谢产物的酶活性（方法同上）。 1.2.3 菌的胞外产物酶活性的测定[2, 3] 采用杯碟法，将滤液在无菌的条件下，分别培养在含有明胶（0.4%）、酪蛋白（0.2%）、淀粉（0