牙鲆自然杀伤细胞增强因子（NKEF）基因的克隆及其表达研究.pdfVIP

牙鲆自然杀伤细胞增强因子(NKEF)基因的克隆及其表达分 析 摘 要 killer 自然杀伤细胞增强因子(Naturalenhancingfactor，NKEF)是近 年来新发现的抗氧化剂家族的重要成员，它最早从人的红细胞中得到分离纯化， 能够增强自然杀伤细胞的细胞毒活性，同时在保护机体蛋白质和DNA免受氧化剂 损伤等方面具有十分重要的作用。本文采用快速扩增cDNA末端(rapid ofeDNA cDNA ends，RACE)的方法，分离和测定了牙鲆NKEF amplification 的全长核苷酸序列，5’RACE扩增分离得到了400bp左右的片段，3’RACE扩增 得到800bp左右的片段，并且扩增出的目的片段都非常特异，经过凝胶回收、连 接、转化、双酶切检测和测序后，剪接得到牙鲆NKEF全长cDNA序列。牙鲆NKEF 开放阅读框和364bp的3’非翻译区，整个开放阅读框编码198个氨基酸，NKEF 蛋白分子量22kD，等电点为7．2，在第52位和173位含有两个半胱氨酸残基， 和其他几种I类抗氧化蛋白家族成员的对比可知，两个位置的半胱氨酸残基是非 常保守的，并且为该族蛋自发挥其生物学功能的氨基酸区域。PCR分析表明NKEF 基因在牙鲆所取组织中普遍表达，但是表达水平存在着明显的差异，并且该基因 在脾脏和头。肾中可以被脂多糖的诱导而表达上调，而在肝脏和小肠中则无此变 化，说明了虽然牙鲆NKEF基因在牙鲆组织中均有表达，但是它们表达的模式则 根据组织和刺激物的不同而不同。该基因还随着牙鲆受精卵的发育而表达水平逐 渐增高。 关键词 牙鲆，自然杀伤细胞增强因子(NKEF)，快速扩增eDNA末端(RACE) and of CIoningexpression naturalkiI Ier anaIysiS enhanci factor fI l ng fr伽Japaneseounder(Para ichthys ol ivacous) Abstract killer Natural killer factor(Naturalenhancing enhancing factor，NKEF)is a ofthe defined member wsa newly peroxiredoxin(PRX)family．Itoriginalpurified fromhumanredblood canenhancethe ofnaturalkiller cells，It cytotoxic activity cells， andit’s to andDNAfrom oxidative veryimportant preventprotein be