CMV43CT转基因小鼠心血管发育异常的实验分析.pdfVIP

HⅡ 疆 先天性心脏病慰小儿时期最常见的心呶管疾瘸，其发生率占活产婴儿的7 溺～10‰，我蓠每年遵生酌耨生J0中约有二十万惑先天性心脏病，邈对社会、家 庭和病人本身都是沉重的负担。因此如何预防先天性心脏瘸的发生以及在发病 罩麓或发病之ji蚕进行于蓣，辫丘先天往心盎管薅形瓣发生帮发震怒心盘管领域 的熏要研究目标。 近年来，篷着遗传学黧分子生携学数不凝发麓，赞对惫心瘸静瘸蠢帮发病 机理的研究取得了徽要的进展，其中一个莺臻的进展是发现细胞缝隙连接礞白 家熟知，但其功能只是在电镜技术威用后才得以进一步阐明。缝隙连接在心脏 在心脏表达，不同的Cx蛋囱之间其功能既有不同又有重叠“’。Cx43是哺乳动 甥心脏中戆主要缝熬连接蛋鑫，叁瓤楚9．5天在心脏中开始表达，对于心簸戆 正常形态发生起着极其重要的作用。1995年，Reaume等“’报道Cx43基因剔 除(knockout参熬模型爱代中，蒸困完全剔除憨凝生鼠予出生艨24小孵蠹 脉瓣狭窄的患者存农Cx43旗墨位蕊缺失。避年来诲多硬究均发现Cx43绝会缺 陷小鼠存在右室流出道梗阻，另外还发现心管环化异常、三尖瓣前上叶分层等 畸形“1。Cx43基因爨常小鼠可致胚脍心血镣系统产生多秘跨形说骥Cx43对于 胚胎心脏的形态发商具有重要作用。目前应用于研究Cx43与心脏发育和心脏 畸形的动物模型有Cx43的基因敲除(Cx43knockout)莘眭Laz融台蛋白取代 CMV43 鼠t2,Sl cT转基因小鼠作为一荦孛新的动物模溅，正弓l起研究者的兴趣， 该模型根据Cx43羧罄末端(eT)具有调节缝隙连接的功能，导入外源性的Cx43 羧基末端，从而影响Cx43缝隙连接通道的缕构和功能∞’。鉴于Cx43在心斑管 薨丕胎发育过程中扮演重要的角色，我们维测CMV43“转蘩困小鼠可能也存在 某些心血管畸形。网此，本课题应用CMV43“转基因小鼠，研究了不同胎龄的 杂合和纯合转蓦因狳鬣的心血管发育以及心功能燮纯情况，探讨萁成为先天洼 心蛾管畸形的动物模型的可能性，并通过观察Cx43蛋白、平滑肌肌动缀白 (Smoothmuscle 的时空表达规律，分析Cx43与a—SMA及FN之间关系，以期进一步阐述Cx43 奁籁骆心菠发育中静{笮嗣帮冒麓掇镪。 CMV43研转基因小鼠心血管发育异常的实验研究 中文摘袈 作用。许多研究发现Cx43耀常小鼠存在右熹流出道梗阻、心管环化异常等畸 形。嚣藩应麓予骚究cx43与心蠹管发育懿劝餐模羹包括：珐链丧失模鍪(Cx43 基因敲除小鼠和FC转基因小鼠)和功能增加模型(CMV43转基因小鼠)。而新 透建立戆CMV43cT转基强小鬣{乍是一释薮懿葫凌楱蓬，遂；霪尊久羚滚注熬Cx43 羧基末端(CT)，观察其对胚胎时期神经嵴细胞活动的调节作用。鉴于外源性 eT胃影嚷Cx43缝骧连接逶遘懿结梭襄功熬，我镌攘测CMV43c1转纂困小簸可 能也存在某贱心血管发育异常。 蟊 的 本课麒应用CMV43”转基因小鼠，研究了不同胎龄的杂合和纯合转基因胎 簸静心盘管发育罄及心功麓交证蒲况，攘毒寸其藏为先天往心盘管碴形酌魂物模 型的可能性，并通过观察Cx43蛋白、平滑肌肌动缀白(a—SMA)和纤维连接 蛋爨(FN)嚣薅空表达焱簿，分褥Cx43与a—SMA及戮之润关蓉，戮麓逡一 步阐述Cx43在胚胎心脏发商中的作用和可能机制。 方法 1．CMV43cT转蒸因小鼠心血管发育的形态学研究：CMV43”转基因小鼠由美 国NIH 稳定的遗传后，杂合子之间相互交配以获得纯合转基因小鼠。小鼠基因型的确 定邋遗扶缓绶中掇敬DNA缝PCR扩增鉴定。两月羚豹成年涟鬣帮罐鬣交配，馥 清晨阴栓出现记为受孕后胎龄(Embryonic 酶擎鬣。将瓤貉解剐分离爱，经石臻毽矮韬片，篌矮耩一要染色，遴过缀织形态 学观察来了解胚胎心脏的发育。部分出生后死亡的新生鼠采取相同处理方法进 行缀织形态学蕊察。 2．CMV43cT转基因胎鼠心功能变化的多普勒趟声心动网检测：两月龄的成 年臻鬣帮雄簸交甏，|三￡清爱瓣毪窭魏记是ED0．5天，选强EDl2，5～17．5静躲藏， 应用多普勒技术对孕龄为12．5～17．5天的正常孕鼠(10只，共149只胚胎)、 杂合转基嚣孕鬣(10只，莛67只胚骆)斧疆纯舍转基因孕鼠(10旯，共95只 胚胎)进行检测，观察孕鼠腹中胎鼠的血流动力学变化，榱测指标有：流入道 舒张期血流蜂值E峰和A峰，流出遭l|