iNOS在脂多糖致热大鼠肝脏表达的免疫组化分析.pdfVIP

中文摘要 目 的 c肝脏是机体产热的重要器官，参与体温调节。近年来，肝脏在 体温调节方面的作用日益受到重视。但到目前为止，关于iNOS 在肝脏的生理和病理状态下所起的作用却少有研究。因此了本实 验从上述问题着手，基于NO广泛的生理和病理作用，研究细菌脂 多糖引起的内毒索性发热中，iNOS在大鼠肝脏中的表达，从而进 一步探讨iNOS在体温调节中的作用。 f实验方法 、＼ 方法：(1)测量体温：在实验前3天每天让动物在实验环境中 适应3小时，大鼠放在特制的鼠笼内，将测温探头插入大鼠直肠内 8em，第4天进行发热实验。实验室温度控制在20—2412。用无 mg／kg剂量 热原生理盐水将脂多糖稀释成lOO斗g／ml，实验时按l 给大鼠腹腔注射。体温测量时，将大鼠放在特制的鼠笼内，将测温 探头插入直肠内8em，并用胶布固定于尾根部，待体温恒定后测 三次体温(每次间隔10rain)以其均值作为基础体温。然后各组注 射相应药物，以后每间隔l小时记录一次体温，直至实验结束。为 了避免生物节律的影响，每次实验均在上午8时30分开始，采用 分批交叉进行各组实验。(2)免疫组织化学技术：将大鼠用20％ 氨基甲酸已酯5ml／kg腹腔注射麻醉，灌流固定，取肝组织迅速置 移入15％的蔗糖磷酸缓冲液中4。C过夜，准备切片。次日将标本 用OCT包埋，恒冷切片机温度调到一20℃，行10txm冰冻切片。 ·1． 用3％H20：窒温下处理切片10min；用5％正常羊血清室溆下处理 30 min；在每张切片上漓勰50出一抗PB液(效价1：100)，4℃下 过夜。次Et，每张诏舞依次滴魏垒物素标记的羊抗兔趋；G(效徐1 将新鲜配制的DAB显色剂滴于标本上，显色10rain，充分水洗后， 苏本素复染。常裁巅度魏承，褥胶封背。使蕉燕襞巨象分爨狡寒， 测定iNOS阳性反应产物的整合光密度值、％阳性面积、平均灰度 值。所有数据以均值±标准差(曼出s)表示，统计分析使用多样本 憋数方差分橱进行显著镶差异的毖较。 结 果 LPS发热维在腹腔注射LPS露体溢逐渐的升离，在滚射后6 小时达到最高值，体温升高1．38℃，明显高予对照组(P《0．01)； 而后逐渐下降，在注射I腾后9小时大鼠的体澈仍高于对照组(P ◇．01)。LPS发热组在舞离俸瀑鹃阋时，氇肖效熬增高翳脏蠹 iNOS活性，与对照组比较，差异非常显著(P0．001)；切片经免 疫组织化学反应、DAB染色后，可在光镜下观察到iNOS阳性产物 璺棕褥色，主要分枣在横否缨照、怒管内皮缨戆、灌酸拉缨霪蠡等缨 脆的胞浆中，在肝细胞膜上也可觅iNOS阳性产物。采用强微图 象分析系统测定iNOS阳性产物的糕合光密度值、平均灰魔值、％ 麓性面积。其中LPS发热组3，6，9hiNOS阳性产物的整合光密度 俊与％阳僚筒积筠高予遥常对照组iNOS的整合光密度德和％阳 性面积(P《0．01)，且以LPS发热组6h的整合光密度值及％阳性 蘧积为最大。平均灰度值则相反，埚发热组3，6，9h的平均灰度 德较对照绕院较均有减少(P0．01)，泼L黔发热缓酿的蘧为最 小。将LPS发热组的体温变化与肝脏组织中iNOS活性变化做相 关分析，结果表明二者之间存在正棚关关系(P《0．01)。{ -L、 -2· 结 论 1．LPS诱导肝脏组织广泛iNOS阳性反应产物，并在大鼠注 射LPS后6小时iNOS阳性反应产物最多。 2．iNOS在肝细胞阳性反应产物主要分布在肝细胞膜。 3．LPS诱导的体温升高和肝脏中iNOS活性增高存在正相关 关系，肝脏内iNOS参与体温调节。 关键词：脂多糖；发热j一氧化氮；诱生型一氧化氮合酶 ·3·