酶工程非水酶学应用.docxVIP

非水相糖苷酶高效催化的研究进展糖基化合物又称糖苷类化合物或配糖体，在生物、医药、食品等领域均有着广泛的利用价值。糖苷酶来源广泛，比较稳定，能接受不同结构的底物，可直接以非保护或非活化的糖作为糖基供体，因此广泛用于酶促糖苷化反应合成各类糖基化合物。传统的糖苷酶催化的反应在水相中进行，随着非水酶学的发展，发现在有机相中的糖苷酶催化的反应有以下优点：①可增加非极性底物的溶解性；②可通过控制反应平衡移动的方向极大地提高产率；③抑制依赖于水的某些不利反应；④转化体系不易染杂菌；⑤可采用双相体系进行转化，便于产物的分离；⑥通过溶剂体系调节有效成分进行定向的转化或修饰。糖苷酶的生物催化反应途径目前己知的糖苷酶有2500多种，它不需要辅酶或辅因子，糖苷酶催化糖苷化反应主要包括两种途径(见图1)：酶催化糖苷逆水解反应[式(1)]，是单糖与醇的缩合反应，其中水是离去基团；酶催化糖基转移反应[式(2)]，离去基团通常是(单)糖基，其中水作为竞争性亲核试剂会引起反应物部分水解。酶催化糖苷逆水解反应受热力学控制，最终会达到一个热力学平衡，达到此平衡后，原料和产物的浓度都不会再发生变化，故反应产率一般较低，这就要通过优化反应条件使反应向合成糖苷的方向进行，或在高浓度(比例)的亲水性有机溶媒中朝着逆水解反应——脱水缩合的方向进行，以提高糖苷的转化率。转糖基作用是受动力学控制的，所以糖苷的产率取决于水解速率、供糖基物质的转化以及产物的生成、水解速率之间的平衡。这种途径形成的糖苷同时又是酶水解作用的底物，因此，要成功应用这一途径合成糖苷，需要注意两个关键点：糖苷化要比糖苷水解快；②产物水解速率比糖基供体的水解速率慢。采用高浓度有机溶剂或两相反应体系，降低水的浓度和活度，可以显著降低产物的水解速率，促使反应向糖苷合成方向进行。2低聚糖、烷基糖苷的非水相生物合成Gribay等人用耐热性糖苷酶，以乳糖和葡萄糖作为底物在水饱和庚醇中合成庚基廿半乳糖苷和庚基葡萄糖昔，比在单水相体系的反应速率提高了3．14倍3 非水相糖基化生物修饰天然产物糖基化合物在各种疾病，如感染性疾病、癌症、炎症等治疗上都显示了巨大的应用前景。天然先导化合物糖基化能增加结构和功能的多样性。另一方面，对天然先导化合物进行糖基化修饰，可以增加其溶解度，提高生物利用度，减少毒副作用，形成高活性及低毒性的天然活性先导化合物。因此，对具有生物活性的天然先导化合物进行糖基化修饰已经成为当今新药创制领域的研究热点。3．1 非水相糖基化修饰黄酮类化合物葛根素是异黄酮类化合物，具有广泛药理活性，由于葛根素在水中的溶解度较低，临床应用时需加入助溶剂，以提高溶解度。目前临床应用的葛根素注射液大多需加入高浓度丙二醇做助溶剂，不仅增加成本，也因为药液黏度过大，过滤提纯比较麻烦，同时不溶性杂质增加，对人体产生一定的毒副作用，致使用药安全性降低。随着研究的进展，人们发现7-O-葡萄糖苷葛根素与7-O-异麦芽糖苷葛根素两种转化产物水溶性较葛根素分别提高了18倍和100倍。体外药物代谢动力学实验表明，7-O-葡萄糖苷葛根素在保持葛根素扩张血管作用的基础上，还具有更高的血药浓度以及更长的药效时间的特点。由于黄酮类化合物在水相中溶解度相对较低，故转化效率较低，所以改进的方法采用将葛根素在有机溶剂中进行糖基化，研究表明在60％乙醇中转糖基作用提高了6倍多。3．2非水相糖基化修饰萜类化合物萜类化合物种类繁多，结构复杂，性质各异，因而具有多方面的生物活性，其中不少化合物是常见中药的有效成分，具有较为重要的生物活性。但是，由于天然物提取比较复杂，同时利用化学法进行结构修饰存在着得率低、反应专一性差、副产物多等缺点，因此利用微生物、酶等对萜类进行修饰成为研究的热点。近年来，研究发现在有机溶剂中进行糖基化修饰可极大地增加生产效率。3．3其它天然糖基化合物的合成4前景与展望参考文献：非水相糖苷酶高效催化的研究进展周晨1，吴薛明1’2，何冰芳1CHEMICALINDUSTRY AND ENGINEERING PROGRESS2010年第29卷第7期实例：非水相介质中生物催化法合成红景天甙化合物的研究在非水相介质中B一葡萄糖苷酶催化合成红景天甙的新方法．研究表明，B一葡萄糖苷酶催化的反应，若在有机介质中进行，则水解反应得到抑制，逆水解反应加强，平衡向有利于糖苷合成的方向移动，立体选择性高、副产物少、因而糖苷生成量远远高于在水相中的生成量．该方法克服了微生物整体细胞催化的缺点，同时为其它具有生理活性糖苷类化合物的酶促合成提供了良好的借鉴．实验选取合成烷基糖苷常用的三种有机溶剂：二氧六环、乙腈、叔丁醇与酶一醋酸缓冲液组成不同的反应体系，以酪醇和D一葡萄糖为底物，h，在下列各反应体系中红景天甙的转化率． ‘表1 B一葡萄糖苷酶在不同反应体系中合成红景React