第二章微生物的纯培养和微技术.pptVIP

第二章 微生物的纯培养和显微技术 培养物（culture）: 指在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体。 纯培养物（pure culture）： 微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代，称纯培养。所得培养物成为纯培养物。 消毒(disinfection)：指采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌,而对被消毒的物体基本无害的措施。(部分杀灭微生物)?? 灭菌(sterilization)：指采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。(彻底杀灭微生物)? 又可分为：杀菌和溶菌两种。? 抑菌(bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。 防腐(antisepsis)：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。 无菌(asepsis)：不存在活菌，多是灭菌的结果。 ???????????????????????????? 火焰灼烧法 干热灭菌法 烘箱内热空气灭菌法 高温灭菌 巴氏消毒法 常压下 煮沸消毒法 间歇灭菌法 湿热灭菌法 常规加压灭菌法 加压下 连续加压灭菌法 几种菌落 先将待分离的材料用无菌水做一系列的稀释(如1﹕10、1﹕100、1﹕1000 、1﹕10 000等等 )，然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。 先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。培养后，菌落形成在琼脂柱的中间。 菌种保藏方法 连续移接 改变条件（干燥、低温、缺氧、缺乏营养等）使菌株的代谢水平降低，乃至完全停止，达到半休眠或完全休眠的状态，而在一定时间内得到保藏，有的可保藏几十年或更长的时间。 在需要时再通过提供适宜的生长条件使保藏物恢复活力。 1、传代培养保藏 是微生物保存的基本方法。 琼脂斜面、半固体琼脂柱和液体培养等。 橡皮塞封口或用石蜡覆盖，并放置低温保存。 4℃保存。 2、冷冻保藏 代谢作用停止。 细胞体积大者要比小者对低温更敏感，而无细胞壁者则比有细胞壁敏感。其原因是低温会使细胞内水分形成冰晶，从而引起细胞，尤其是细胞膜的损伤。 速冻及快速解冻可减少损伤；还可加一些保护剂，如0.5%左右的甘油或二甲亚砜可透入细胞，并通过降低强烈的脱水作用而保护细胞； 大分子物质因此在采用冷冻法保藏菌种时，一般应加入各种保护剂以提高培养物的存活率。 3、干燥保藏法 沙土管保存和冷冻真空干燥保藏是最常用的二项微生物干燥保藏技术。 沙土管保存 一般将菌种接种至斜面，培养至长出大量的孢子后，洗下孢子制备孢子悬浮液，加入无菌沙土试管中，减压干燥，直至将水分抽干，最后用石蜡、橡胶塞等封闭管口，置冰箱保存。此法主要适用于产孢子的微生物，如芽孢杆菌、放线菌等，保藏时间相对较长。 冷冻真空干燥保藏 是将加有保护剂的细胞样品预先冷冻，使其冻结，然后在真空下通过水的升华作用除去水分。达到干燥的样品可在真空或惰性气体的密闭环境中置低温保存，从而使微生物处于干燥、缺氧及低温的状态，生命活动处于休眠，可以达到长期保藏的目的。 用水升华的方式除去水分，手段比较温和，细胞受损伤的程度相对比较小，存活率及保藏效果均不错，是目前使用最普遍，也是最重要的微生物保藏方法。 分辨率:指能辨别两点之间最小距离的能力。 反差:指样品区别于背景的程度。 一、显微镜的种类