药学分子生物学（唐晓波）第9章第二节　药物蛋白质.pptVIP

复习 第一节 蛋白质组学概述 蛋白质组 * proteome是由一个基因组、一个细胞、一个有机体或某一特定的组织类型所表达的全部蛋白质。 蛋白质组学 * proteomics是研究蛋白质组的科学。 包括蛋白质的组成、表达水平、翻译后修饰、蛋白质间相互作用等。 1.表达蛋白质组学 *比较不同样品间蛋白质表达谱、表达量、修饰的差异，发现疾病特异性蛋白质或药靶。 2.结构蛋白质组学 *对特定细胞器中全部蛋白质或蛋白质复合体的结构进行分析，确定它们在细胞中的定位，了解蛋白质之间的相互关系。 3.功能蛋白质组学 *研究执行某种功能的： 蛋白质复合体 蛋白质-蛋白质相互作用 蛋白质-DNA/RNA相互作用 蛋白质翻译后修饰。 *蛋白质组学技术 （一）双向凝胶电泳 （二）生物质谱 （三）蛋白质芯片 （四）酵母双杂交 （五）生物信息学 *肽质量指纹谱（PMF） 肽质量指纹谱（Peptide Mass Fingerprinting, PMF）是蛋白质被识别特异酶切位点的蛋白酶水解后得到的肽片段的质量图谱。 *双向电泳+质谱研究蛋白质组的程序 样品制备（蛋白质提取） 蛋白质分离（双向电泳） 凝胶染色（便于观察） 图像分析：寻找丰度差异的斑点 胶内酶切（肽混合物的制备） 质谱分析（获得肽指纹图） 数据库检索（鉴定） *生物信息学在蛋白质组学的应用 分析和构建双向凝胶电泳图谱 搜索与构建数据库 蛋白质结构和功能的预测 分析软件、检索软件的应用与开发 第二节　药物蛋白质组学及应用 Pharmacoproteomics 药物蛋白质组学概念 将蛋白组学的理论和技术用于药物研究领域，通过对比健康状态与疾病状态的细胞或组织的蛋白质组表达差异，用于药物研究或药物受体的研究或药物治疗前后蛋白质表达状况的分析，以评价药物类似物的结构与活性关系，寻找高活性的药物，由此发展起来的一门学科称之为药物蛋白组学。 主要内容 一、药物蛋白质组学概述　???　 二、药物蛋白质组学应用　???　 三、蛋白质组学在药物不良反应研究中的应用　???　 四、蛋白质组学在中药研究中的应用　???　 一、药物蛋白质组学概述 将表达差异用于下列研究 : 药物作用机制 药物不良反应 药物结构类似物的结构与功能的关系 新药靶等 药物蛋白质组学的研究内容 临床前：发现药靶和药物、研究药物作用机制和毒理学机制 临床：药靶作为选择药物的依据和临床诊断的标记物、个体化治疗 中药药理和新药发现 二、药物蛋白质组学应用 经典技术路线：双向电泳+质谱 正常组 疾病组 给药组 药理药学研究 （一）构建分子药理筛选模型 （二）药物靶点的发现、验证和优化 （三）药物作用机制研究 （四）药物毒理机制研究 （五）耐药机制研究 （一）构建分子药理筛选模型 *药物筛选模型: 是用来确证某种物质是否具有生物活性和治疗作用（及药理活性）的一种实验方法。 *新药筛选模型 整体动物模型 组织、器官水平模型 分子水平模型 1.整体动物模型 作为动物病理模型的3个条件： 病理机制相似性 病理表现的稳定性 药物作用的可观察性 1.整体动物模型 优点：直观。 不足：依赖手工；样品数受限；局限性、效率低、费用高。 2.组织、器官水平模型 血管 心脏灌流 组织培养等 2.组织、器官水平模型 优点：样品用量少；动物耗费少，多药同筛，降低成本；减少了影响因素。 不足：规模小、效率低，不易实现一药多筛，技术要求高。 3.分子水平模型 即蛋白质水平 自动化 大规模 高通量(High throughput screening，HTS) （二）药物靶点的发现、验证和优化 药物靶点的发现 药物靶点的验证 药物靶点的优化 1.药物靶点的发现 *Drug target(药物靶点)： 是细胞内与药物相互作用，并赋予药物效应的分子。 作为药靶的必要条件： 疾病成分中高表达 体外实验：可控 动物实验：再现 人体试验：有效 *蛋白质组学发现药靶的基本策略 比较正常与疾病： 组织 细胞 或体液 的蛋白质表达谱差异和表达量变化。 药物靶点 （1）以疾病特异性蛋白为药物靶点 （2）以生物标记分子为药物靶点 （3）以酶分子为药物靶点 （4）以信号转导分子为药物靶点 生物标志物 对于疾病研究，生物标志物一般是指可供客观测定和评价的一个普通生理或病理或治疗过程中的某种特征性的生化指标，通过对它的测定可以获知机体当前所处的生物学过程中的进程。 2.药物靶点的验证 研究靶蛋白的功能，确定其作用，具体技术： 酵母双杂交系统 逆双杂交：相互作用、URA3表达、抑制 胞质双杂交：分析膜蛋白 蛋白质芯片 化学蛋白质组学：精确灭活活细胞蛋白 生物传感芯片、转染细胞微阵列、转基因技术和基因敲出技术 3.药物靶点的优化 作为靶点的蛋白质是否为候选药物的最佳选择，是否为治疗的最佳