日立FE-SEM SU80X0 与冷冻台的联用 - 天美(中国)科学仪器有限公司.PDF

天美（中国）科学仪器有限公司 Application TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7 号楼1、3 层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 日立FE-SEM SU80X0 与冷冻台的联用 扫描电镜工作者都面临着一个不能回避的问题 ，就是生命科学、以及许多材料科学 领域的样品都含有液体成分 ，很多动植物组织含水量达到98% ，这是扫描电镜工作者 最难对付的样品问题。虽然各种VP、LV 和 ESEM 的出现，已允许扫描电镜观察未经冷 冻或干燥的样品，但是冷冻制样及扫描电镜传输系统 (Cryo-SEM) 仍然是防止液体、 半液体、生命材料及对电子束敏感的样品（如溶胶、高分子材料等）样品丢失水分的最 有效方法 ，可以实现从制样到观察整个过程在冷冻状态下迚行。Cryo-SEM 能应用于任 何真空状态，包括向样品室内冲以水气 ，并丐还具有冷冻断面及控制样品升华刻蚀来选 择性地去除表面水分（冰）从而揭示出大量的重要内部信息等功能。而日立冷场发射扫 描电镜在观察不导电样品具有非常大的优势，通过丏利Super E×B 设计，减轻荷电影 响，不需喷镀，可以直接观查不导电样品 ，同时在极低的加速电压下仍然具有很高的分 辨率，低加速电压不仅能减轻电子束对样品表面的损伤，也使观察样品极表面的信息成 为可能。因此，本文采用日立冷场发射扫描电镜SU8020 与Quorum PPT3000T 冷冻 传输系统联用对生物样品迚行观察。 图一是经过冷冻断裂的芽殖酵母细胞。样品通过冷冻断裂及镀膜复型，可以使各种 膜断面及细胞器平面裸露，如疏水面(PF face: protoplasmic fracture face) ，疏水的劈 裂面(EF face: exoplasmic fracture face)及一些内部断裂面。 图一：冷冻断裂的芽殖酵母细胞 FE-SEM 图像 天美（中国）科学仪器有限公司 Application TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7 号楼1、3 层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 如图二所示，通过对冷冻断裂的芽殖酵母细胞疏水面迚一步放大，芽殖酵母细胞 膜典型的内陷(CMI: cell membrane invagination)及细胞膜内表面的蛋白质颗粒可以 清晰地观察到，并丐有些蛋白质颗粒呈六方排列。 图二：冷冻断裂的芽殖酵母细胞疏水面的FE-SEM图像 通过冷冻断裂及镀膜复型，芽殖酵母细胞的细胞壁(CW: cell wall)、细胞膜(CM: cell membrane)、内质网(ER: the endoplasmic reticulum)、线粒体(M: mitochondrion)、 核膜孔(NP: nuclear pore)、细胞核(N: nulear)等各种细胞结构都可以清晰地观察到（如 图三左）。通过保持细胞核丰富的表面信息，细胞核膜的外表面(*)、内表面(#)以及核膜 孔(NP)等细微结构都能很好的辨认（如图三右）。 图三：冷冻断裂的芽殖酵母细胞FE-SEM 图像 图四是脂质体悬浊液的FE-SEM 观察图像，通过冷冻断裂及镀膜复型制样后，脂质 体的各种内部结构都能清晰地观察到。 天美（中国）科学仪器有限公司 Application TECHCOMP (CHINA) LTD. 中国北京朝阳区天畅园7 号楼1、3 层 TEL:010 FAX:010 E-MAIL:techcomp@techcomp.cn 图四 ：冷冻断裂的脂质体悬浊液的FE-SEM 图像 总之，用于扫描电子显微镜的超低温冷冻制样传输技术(Cryo-SEM)在观察“湿”样品 或对电子束敏感的样品时已成为必不可少。使用这种技术可替代常规的生物样品预处理 制样技术，无需临界点