十六人类染色体分析：外周血培养制备染色体标本.ppt

十六 人类染色体分析：外周血培养制备染色体标本 一、实验目的 学习外周血淋巴细胞悬浮培养的原理和方法，利用培养后进行分裂的细胞制备人类染色体标本。 了解人类染色体的基本形态特点，为核型分析和原位杂交实验提供良好的染色体标本。 二、实验原理 外周血中的淋巴细胞几乎都是处在G0期或G1期，一般情况下是不分裂的。当在培养基中加入植物血凝素（phytohemagglutinin PHA）时，这种小淋巴细胞受到刺激后转化为淋巴母细胞，并开始进行有丝分裂。经过短期培养后，用秋水仙素处理、低渗、固定、滴片和染色，就可获得大量中期分裂相的细胞，制片后可以清楚地对染色体进行观察。这种培养方法是Moorhead于1960年建立的。在人类遗传分析中普遍采用外周血培养的方法获取分裂的细胞，进而开展临床和基础遗传学的研究，这对于遗传疾病的检出以及遗传咨询等工作发挥了重要作用。 三、实验用具及材料 培养瓶、注射器、移液管、量筒、G6漏斗、抽滤器、恒温水浴箱、锥形瓶、离心机、分液器、RPMI1640、小牛血清、植物血凝素（PHA）、NaHCO3、生理盐水、肝素、1.0g/L秋水仙素溶液、低渗液（0.025M KCl）、固定液、4.0g/L酚红、链霉素、卡那霉素 四、实验方法及步骤 1.实验用具的灭菌 玻璃器皿的灭菌 G6漏斗的灭菌 橡皮塞的灭菌 包装物的灭菌 2.各种试剂的配制、稀释过程 3.培养基的配制 RPMI1640 体积分数80% 小牛血清 体积分数20% PHA40ug/mL 青霉素 100单位/L培养基 链霉素 100单位/mL培养基 卡那霉素 100单位/mL培养基 操作流程 操作 人中期细胞染色体（染色体数目2N=46） 人 五、实验注意事项 1.接种的血样愈新鲜愈好 。 2.培养中成败的关键,除了至为重要的PHA的效价外。培养的温度和培养液的酸碱度也十分重要。 3.培养过程中，如发现血样凝集，可将培养瓶轻轻振荡，使凝块散开，继续放回37℃恒温箱内培养。 4.制片过程中，如发现细胞膨胀得不大，细胞膜没有破裂，染色体聚集一团伸展不开,可将固定时间延长。 六、作业及思考题 1.将分散良好的标本进行显微镜照相。 2.观察人类染色体的形态、结构特点。 3.总结做好本实验的关键因素。 4.对比男性和女性的染色体标本，比较异同。 * *