水稻农林8号、农林8号m cDNA文库的构建和BSL基因的筛选.pdfVIP

摘 要 水稻农林8号m是农林8号通过”c0Y射线辐射诱变获得的一个突变体。遗传分析 表明：该突变性状表现为隐性单基因的遗传，在苗期能被0．05％以上的苯达松全部杀死， 而其它常规品种则表现为对苯达松的抗性。而且，苯达松敏感致死基因对水稻的农艺性 状和杂交优势没有不良的影响。将苯达松敏感致死基因转化到不育系或恢复系中，可以 用于保证和提高水稻杂种纯度，革新水稻的制种方法。 位剂量，每个单位剂量约2．6x10”N+／cm2)进行诱变处理，处理后的农林8号m发苗至 苗二叶期，用0．05％苯达松水培筛选抗性苗，未能获得使农林8号m突变基因功能恢复 抗性苗，推测该突变可能不是点突变导致的。 农林8号和农林8号m种子萌发15天左右至苗二叶期。以稻苗为材料，抽提总RNAs， 分离mRNAs。分别构建农林8号和农林8号m eDNA文库。初级文库的库容量分别为1．2 ×106，】．4×106。随机挑取28个噬菌斑，用k T，作引物，通过PCR检测，获得插入 上述所有皆符合cDNA文库建的总体要求。 参照农林8号和农林8号nl RAPD分子标记的结果，设计特异引物，通过PCR获得 制备探针的DNA模板。用地高辛标记模板制作探针与农林8号eDNA文库中约30万个克 隆子进行Southern原位杂交。获得了一些有杂交信号的噬菌斑，并对目的片断进行克隆 和序列分析。 关键词：农林8号和农林8号m，苯达松，苯达松敏感致死基因，回复突变，cDNA文 库构建，核酸杂交。 Abstract 8m AchemicallethalricemutantNorin thebentazonesensitivelethal carting gene radiation．The wasinducedfromNorin8 60Co resultsindicatedthatbentazone by gamma—ray a wascontrolled recessive 8m can sensitivelethal Norin gene bysingle gene．The seedling be its killed Fl are has bentazone(above0．05％)，butseedlingssafe．Furthermore，the by gene no no effectson traitsmatterwhetheritis or negative agronomic homozygousheterozygous． The for and themarkerin its techniquestransferringselecting gene and breedingpr