净化养殖水体紫色非硫光合细菌的筛选与鉴定.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（８）：９１～９５ 净化养殖水体紫色非硫光合细菌的筛选与鉴定 １，２ １ １ ２ １ 刘　芳 　王　敏 　杨　慧 　孙军德 　高俊莲 （１北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心　北京　１０００９７　２沈阳农业大学土地与环境学院　沈阳　１１０１６１） 摘要　从杭州养鱼塘水样及底泥样品中富集分离得到３株紫色非硫光合细菌，分别命名为ＨＺ３， ＨＺ４，ＨＺ５。通过比较这３株菌对鱼、虾养殖水体的净化效果，筛选出菌株ＨＺ５净化能力较强，经 过５天的处理，该菌株使养鱼塘水样的ＣＯＤ降低２４．８７％；使养虾池塘水样的ＣＯＤ降低 ３６． ９９％；使养鱼塘水样的亚硝态氮的降解率达到９７．７９％。对菌株ＨＺ５进行了形态学观察、生理生 化鉴定、活细胞吸收光谱以及１６ＳｒＤＮＡ序列分析。１６ＳｒＤＮＡ序列分析结果表明该菌株与沼泽红 假单胞菌的１６ＳｒＤＮＡ序列有高达９９％的同源性，结合形态特征和生理生化特性以及活细胞吸收 光谱特征等，将其鉴定为沼泽红假单胞菌（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐａｌｕｓｔｒｉｓ）。 关键词　养殖水体净化　紫色非硫光合细菌　筛选与鉴定 中图分类号　Ｑ９３３３１ 　　随着我国规模化，高密度水产养殖业的迅速发展， 市西湖区龙王沙村养鱼塘水及底泥，用于菌株筛选的 由残余饵料、水产动物排泄物及抗生素的广泛使用造 养殖水体样品采自北京市通州区永乐店镇小务村养鱼 成的污染，使养殖水体有机物、氨氮、亚硝态氮、硫化氢 池塘及养虾池。 含量增加，溶解氧下降，水产养殖动物病害频繁发生， １．１．２　培养基　富集用培养基配方参见文献［３］，其 ［１］ 组成为每升含氯化铵 １ｇ，乙酸钠３．５ｇ，氯化镁０．１ｇ，氯 造成了养殖水体污染严重及影响食品安全等问题 。 紫色非硫光合细菌（ｐｕｒｐｌｅｎｏｎｓｕｌｆｕｒｂａｃｔｅｒｉａ，简称 化钙０．１ｇ，磷酸二氢钾０．６ｇ，磷酸氢二钾０．４ｇ，酵母膏 ＰＮＳＢ），也称红螺菌科光合细菌，是一类在厌氧条件下 ０．１ｇ，ｐＨ值调至７．２。分离用液体培养基为矿物盐－丁 进行不放氧光合作用的特殊菌群，广泛分布于海洋、湖 二酸钠液体培养基，参见文献［４］，其组成为每升含磷 泊等自然水环境中，是所在的环境物质循环和能量流 酸二氢钾０．３３ｇ，７水硫酸镁０．３３ｇ，氯化钠０．３３ｇ，氯化 ［２］ 铵０．５ｇ，２水氯化钙 ０．０５ｇ，丁二酸钠 １．０ｇ，酵母粉 动的主要参加者之一 。由于它们能在好氧、厌氧以 及光照、黑暗条件下异养生长，且细胞富含蛋白质、氨 ０．０２ｇ，ｐＨ值调至６．８～７．２。高压蒸汽灭菌后，加入微 基酸等多种生理活性物质，因而成为具有净化养殖水 量盐溶液 １．０ｍｌ，０．０２％ ７水硫酸亚铁溶液 ０．５ｍｌ。 体、增加动物营养、促进生长和增强防病抗病能力等功 其中，微量盐溶液组成为每升含７水硫酸锌 １０ｍｇ，４水 ［３］ 二氯化锰３ｍｇ，硼酸３０ｍｇ，６水二氯化钴２０ｍｇ，２水二 能的重要微生物资源 。本研究从水产养殖水体中富 集、分离、筛选、鉴定具有高效净化能力的紫色非硫光 氯化铜１ｍｇ，６水二氯化镍２ｍｇ，钼酸钠３ｍｇ，ｐＨ值调 合细菌，旨在为研制生态、环保的微生物养殖水体净化 至３～４。分离用半固体培养基是在矿物盐 －丁二酸 剂奠定基础。 钠液体培养基中加入每升６ｇ琼脂。 １．２　方　法 １　材料与方法 １．２．１　紫色非硫光合细菌的富集和分离纯化　（１） １．１　材　料