共聚焦激光扫描显微镜在皮肤科应用.docVIP

共聚焦激光扫描显微镜在皮肤科应用【摘要】共聚焦激光扫描显微镜（confcallaserscanningmicroscope,CLSM）具有高分辨率、高灵敏度、三维重建、动态扫描成像等特点，使图像更为精确清晰和数字化，且安全、无创，被广泛应用于细胞生物学、生理学、药理学、医学等各个领域，尤其近十年在皮肤疾病的诊断、疗效检测、皮肤美容、皮肤显微外科等方面的应用发展迅速，又被称为“皮肤CT”。本文综述了激光扫描共聚焦显微镜的结构、工作原理及其在皮肤科的应用。 【关键词】共聚焦激光扫描显微镜；皮肤CT；皮肤疾病；皮肤美容；皮肤显微外科 【中图分类号】R75【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）04-0531-02 1 共聚焦激光扫描显微镜的结构及工作原理 共聚焦激光扫描显微镜（confcallaserscanningmicroscope,CLSM），在结构配置上，除了普通光学显微镜的基本结构外，还具有激光光源、扫描装置、检测器、计算机系统（包括数据采集、处理、转换、应用软件）、图像输出设备、光学装置和共聚焦等部分。CLSM以激光作为点光源，通过物镜聚焦于组织内，组织内焦点处反射或反向散射回来的光由同一物镜接收，再由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描，从而产生一幅完整的共焦图像，只要载物台沿着Z轴上下移动，将样品一个新的层面移动到共焦平面上，样品的新层面又成像，随着Z轴不断移动，就可得到样品样品不同横切面连续的光切图像,扫描后可得到信噪比极高的光学断层图像，分辨率比普通显微镜提高1.4倍。 2 激光扫描共聚焦显微镜在皮肤科的应用 2.1 对正常皮肤的观察：共聚焦激光扫描显微镜所成图像为水平切面图，由于不同组织对激光的反射和反向散射系数不同，因而所显示的黑白深浅也不同，类似X光片的灰度图像，其中黑色素和角蛋白的反射系数较高，成像为较亮的区域，反射系数较小的组织成分，如胞核和胶原较暗。CLSM的空间分辨率［1］为横向0.5-1.0um,轴向为3-5um,可清晰显示细胞结构。我们知道，表皮的主要细胞为树突状细胞（DC）和角质形成细胞（KC），近年关于DC的形态学研究，［2］主要集中在朗格汉斯细胞（LC）,通过应用LSCM对表皮LC进行荧光成像发现：正常表皮LC呈圆盘状结构，其扁平的表面与皮肤表面相平行；每一个LC具有五到九个不同长度的突起，其中有突起是细胞体直径的两倍，进一步应用三维图像重建功能发现树状突起之间并无直接的接触和连接存在，解决了普通显微镜成像研究中的疑点。Bauer等［3］用CLSM发现，LC和其他表皮细胞的比率是恒定不变的，它们之间的比值为1.86%，即一个LC对周围53个表皮细胞起着免疫监督作用。值得注意的是，不同取材部位，尤其是曝光部位与非曝光部位，镜下结构会有所不同。 2.2 在皮肤疾病中的应用 2.2.1 基底细胞癌（BCC）：基底细胞癌是白色人种中最多见的一种皮肤肿瘤，一项研究显示，美国每年新增基底细胞癌病例100万，且多发在高危部位，如鼻、眼、耳、嘴周围，所以早期诊断早期、早期精确地显微手术切除非常必要。Gerger等,将20位已确诊的基底细胞癌病人的新鲜组织标本及正常皮肤的样本120张，分别给予4位从未接受过CLSM的住院医生和皮肤病理学医生，同时给予他们BCC的诊断标准：肿瘤细胞核；肿瘤细胞巢；肿瘤的细胞分裂；肿瘤周围细胞呈栅栏状排列；肿瘤细胞间质会所呈现特征性的腔隙。其中肿瘤细胞核、肿瘤细胞巢作为诊断标准的敏感性和特异性更强，后三项稍弱，总的结果达到了非常高的准确性。 2.2.2 黑素细胞肿瘤：CLSM非常适合于黑素细胞性病损，因为大量的黑素具有强烈的对比。研究117例黑素细胞肿瘤，其中90例良性痣和27例恶性黑素瘤，黑素细胞的形态、结构和角质形成细胞的界限、树突样结构的分支类型及黑素细胞明亮程度的均一性被列入诊断标准，其中前三项是首先考虑的诊断要点，总的敏感性为88.15%，特异性为97.6%.对组织病理不易区分的恶性黑素瘤与Spitz痣患者进行CLSM检查可以发现恶性黑素瘤特征性图像以提高诊断率。 2.2.3 日光性角化病（AK）:是一种能够发展为鳞癌的角质形成细胞异常，利用CLSM可以观察到AK的典型特征,观察了临床诊断为AK的患者7例，成像中检测到角化过度、角质形成细胞不典型增生、真皮浅层炎症细胞浸润、血管增多增粗、光化性弹力纤维变性，其中角质形成细胞的不典型增生的敏感性（97.1%）和特异性（83.3%）较高，可作为主要的诊断指标。CLSM可作为AK早期筛查、诊断和治疗的随访观察。 2.2.4 接触性皮炎：为了评价CLSM诊断过敏性接触性皮炎的敏感性和特异性，16位参与者使用变应原和对照物进行斑贴试验并于72小时