重氮化法合成全抗原的研究.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiA ．Sci．2012。40(11)：6568—6569 责任编辑 陈玉敏 责任校对 李岩 重氮化法合成全抗原的研究 孔令文，周弘春 (‘浙江海洋学院海洋科学学院，浙江舟山316000) 摘要 [目的]制备氯霉素全抗原，探索氯霉素合成的方法，为动物免疫试验作准备。[方法]采用重氮化法合成氯霉素卵清蛋 白全抗 原．通过紫外法和红外光谱法测定合成的偶联效果。[结果]重氮化法可用于制备较高偶联率的氯霉素全抗原，用于免疫动物制备抗体。 [结论]该研究为合成高效价的抗体奠定了基础。 关键词 氯霉素；全抗原；重氮化法 中图分类号 $851．347；TS254 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2012)11—06568—02 StudyontheS~ntheslsofChloramphenieolCompleteAntigenUsingDiazotization KONGLing．wenetal (InstituteofMarineScience，ZhejiangOceanUniversity，Zhoushan，Zhejinag316000) Abstract [Objective]Theaimwastopreparechloramphenicolcompletenatigennadexploresynthesismethodsofchloramphenieol，tOprovide basisforanimalirr~unolOgytest．[Methods]Diazotizationwasadoptedtosynthesizechloramphenicolovalbumincompleteantigen，moreover， thecouplingeffectsofthesynhtesiswereidentifiedusingultravioletmethodnadinfraredspectrum．1Result】Diazotizationcanbeusedtoprepare chloramptltenicblcompleteantigenwithhighcouplingrateandprepraeantibodyofimmuneanimals．[Conclusion]Thestudylaidthefoundation forthesynthesisofhightiterantibody． Key喇oIndg Chloramphenicol；Completeantigen；Diazotization 氯霉素(Chloramphenicol，CAP)在动物的肉、奶、蛋中的 机；TU一1800紫外光谱仪；红外光谱仪；真空冷冻干燥机。 残留问题 日益受到人们的关注，由于氯霉素的残留具有极严 1．2 方法 重的毒副作用，可导致机体产生抗药性和引起体内微生物群 1．2．1 全抗原的合成。参照宋砚斋 、王谦 、徐修远 等 落失衡，欧美等发达国家已相继禁止使用。氯霉素的残留传 的方法并予以调整，具体步骤如下：①还原：取0．20mmol的 统检测方法很多，主要包括：微生物法、比色法、气相色谱法 氯霉素半抗原溶于700 无水乙醇中，用 1mol／LHC1调pH (GC)、高压液相色谱法(HPLC)、放射酶分析法(REA)和酶 至1，加入0．45mmol的锌粉65℃下反应40min，反应结束后 免疫测定法(EIA)等。免疫分析方法具有灵敏、特异、简便的 变为淡黄色 ，冷却离心得到黄色、清亮透明的上清液。②重 优点 。采用免疫分析方法获得特异性强的抗体是关键。 氮化 ：用 1mol／LHC1将所得上清液pH调至 1后 ，加入O．2g 然而，制备抗体的先决条件是获得偶联率符合要求的抗原。 亚硝酸钠(溶于3OTnl超纯水中)，加入时边搅拌边滴加亚硝 合成氯霉素全抗原的方法有很多，主要包括：羰基二咪唑法 酸钠，同时用淀粉碘化钾试纸显色，直至变灰蓝色，显色时间 (DCC法)、混合酸酐法、戊二醛法、重氮化法等。这些方法都 是滴加后 1～3S。然后继续4℃避光反应 1h，即得到暗黄色 有各 自的优缺点，比如 ：混合酸酐法操作复杂，控制条件严 的浑浊液体。然后用 1mol／LNaOH调pH约为8出现黄