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樱桃果实中黄酮类物质提取探究摘要：文章采用正交试验,以芦丁标准品为对照，以75%乙醇为提取剂。研究不同温度，时间，固液比三种条件下，对中国甜樱桃果实中黄酮提取的影响，找出最佳的樱桃果实中黄酮类物质的提取工艺。结果表明，在提取温70℃条件下, 固液比1∶40(g:mL),提取时间2h，最佳工艺条件下黄酮产率较高。 关键词：樱桃；黄酮；正交试验 中图分类号：Q946.91+9 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2010）-09-0060-2 0 前言 中国甜樱桃(Cerasus pseudocerasus L.)为蔷薇科李属樱桃亚属的乔木型果树。起源于中国、亚洲西部及欧洲东南部，我国各地均有栽培[1]。它是北方地区上市最早的鲜果，素有“春果第一枝”的美誉，樱桃营养丰富，尤其富含花青素、各种花色苷、大量的褪黑激素等黄酮类化合物。现代医学研究表明：黄酮类物质具有降血糖、降血脂、降血压、抗心律失常，加强维生素C的抗氧化和清除自由基等作用[2]。根据近年来赖毅勤、周宏兵[3]对黄酮类化合物提取方法的研究，参照我院的实际情况，我们采用了有机溶剂提取法这种常规方法。本课题试验旨在找到樱桃果实黄酮最佳的提取工艺，为樱桃资源的开发利用，以及黄酮类物质的提取提供理论参考。 1 实验 1.1 材料与仪器 本次试验所用的材料为中国甜樱桃果实，2009年4月底，于西昌市樟木乡采集15年生中国樱桃果树，分别在向阳面和背阴面的上、中、下三个树层中采集500颗樱桃果实为一组，共三组，以冷冻形式保存。试验用芦丁为对照，该品购于成都药品生物制品检定所。F分析仪器采用，722E型可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），电子分析天平scoutTM pro（奥豪斯国际贸易上海有限公司）。 1.2 试验设计 本试验不考虑因素之间的交互作用，采用正交试验法。设定了3因素，3水平，3次重复（见表1）。 1.3 方法 1.3.1 标准曲线的制备 精密称取芦丁对照品20.00mg，置100.00ml量瓶中，加75%乙醇溶解至刻度，摇匀即得对照品溶液。分别吸取1.00、2.00、3.00、4.00和5.00mL分别置于25.00ml比色管中，加5.00ml的75%乙醇，各加1%的ALCL35.00ml，摇匀放置6min，然后在用75%的乙醇定容至刻度，摇匀，再放置20min，以同法配制空白对照，在420nm波长处，测定吸光度值，得回归方程A=26.939C+0.0074，相关系数r=0.9998，A为吸光度，Cshy;为浓度。 1.3.2 样品处理及黄酮含量测定 取出冷藏的樱桃果实，将果实脱粒烘干恒重后用研磨器磨碎并过100M的筛。配制一定量的75%的乙醇溶液备用。配制一定量的1%三氯化铝溶液备用。先称取定量（50g）过筛后，每个处理取样品0.50g，用75%乙醇溶液为萃取液，在不同处理条件（表1）进行电热恒温水浴锅振荡加热，过滤；剩余残渣再按原处理加入75%乙醇，置入电热恒温水浴锅振荡加热，共设置三次重复。然后用75%的乙醇定容到100.00ml，摇匀；在取50%的溶液定容到100.00ml，摇匀。取5ml样品乙醇提取液与25.00ml的比色管中，加入1%三氯化铝溶液5.00ml，然后用75%的乙醇定容到刻度。在波长（420nm）处进行比色作测定。用芦丁做个标准曲线[4-6]（图1），根据曲线方程计算出样品中的黄酮含量，然后用正交设计研究樱桃黄酮类化合物的最佳提取条件。 2 结果与分析 2.1 正交试验结果及分析 根据黄酮含量计算公式和正交试验原理计算结果（见表2）。 根据试验结果和数据分析（见表2），R值可判断出各因素对中国甜樱桃果实中黄酮含量的影响由A，B，C 递增，同时，根据方差分析理论，得到方差分析结果（见表3）。结果表明，因素C因素（提取剂用量）对提取工艺影响非常显著（P＞0.01）。由于因素水平数≥3时，F检验显著，并不一定所有的水平之间差异都显著，因此，必须对C因素进行多重比较，作q检验。 2.3 不同固液比的q测验 表4、表5显示，在C因素（提取剂用量）不同水平下的比较，结果表明，C3（提取固液比1∶40）与其他两个水平C1（提取固液比1:20）、C2（提取固液比1:30）之间差异皆极显著， C1（提取固液比1:20）、C2（提取固液比1:30）之间无显著差异，C3水平表现最优。 3 结论 中国甜樱桃果实中提取总黄酮含量的最佳工艺条件为A3B2C3，提取值为78.58mg/100g，即提取温度为70℃，每次回流提取2小时，固液比为1:40g/mL为最佳。提取工艺中各因素对中国甜樱桃果实中总黄酮含量的影响由C、B、A递减，其中C