高效液相色谱法测定刺梨粉中维生素C含量.docVIP

高效液相色谱法测定刺梨粉中维生素C含量摘要：试验建立高效液相色谱测定刺梨粉中的维生素C的含量的方法。方法：样品用5g/L草酸超声提取，采用高效液相色谱法。结果：该方法的线性范围为0.020-0.1mg/ml，以0.05mol/L磷酸二氢钾:甲醇（96:4）为流动相，经C18色谱柱分离，用紫外检测器在280nm波长下测定检出限为0.1ug样品的加标回收率为88.57-99.12%，相对标准偏差为1.13-2.82%。结论：该方法灵敏度高，选择性好，操作简便快捷，具有很好的实用价值。 关键词：高效液相色谱法；维生素C；刺梨粉 中图分类号：R446.1 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2010）-11-0045-2 抗坏血酸又称维生素C，存在于新鲜蔬菜和水果中，它是维持人体正常生理功能的重要维生素之[1]。标准测定维生素C的方法主要有荧光光度分析法[2]，2，6-二氯靛酚钠盐滴定法[3]，2，4-二硝基苯肼比较法[4]等。由于维生素C具有较强的还原性，在中性和碱性条件下稳定，遇热容易破坏，上述方法灵敏度低、操作繁琐、费时，测定值往往偏低，高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的特点[5]，为了快速的测定刺梨粉中的维生素C，简化样品预处理过程，采用高效液相色谱法对维生素C进行检测。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 LC-2000液相色谱仪，配有紫外检测器；色谱柱：C-18柱（5um，4.6x250mm）KQ-250超声波清洗器，实验所用水均为超纯水，甲醇为色谱纯，所用试剂均为分析纯。 1.2 色谱测定条件 流动相：0.05mol/l磷酸二氢钾：甲醇（96：4），检测波长：280nm，流速：1.0ml/min，柱温：30oC，进样量20。在上述色谱条件下，维生素C的保留时间约为15min。按维生素C峰计算理论塔板 数不低于2000，维生素C与杂峰的分离度大于10 。 1.3 操作步骤 1.3.1 检测波长的选择 用流动相配制标准品和样品液，用UV法在200-370nm扫描，结果维生素C的最大吸收波长为280nm，故选用高效液相色谱分析维生素C的最佳检测波长为280nm. 1.3.2 流速和柱温选择 改变流动相流速进行测定，流速过低，分析时间增长；流速过高，样品分离度不够；本实验选用流动相流速为1.0ml/min，改变柱温从10-40℃，观察柱温对维生素C的保留时间和峰面积的影响。保留时间随温度增高而降低，柱温在25-35℃范围内维生素C的色谱峰面积最大，考虑到维生素C对热不稳定，因此，选择在30℃条件下进行测定。 1.3.3 流动相的比例 流动相磷酸二氢铵溶液与甲醇的比例为96:4时，保留时间为15min，维生素C能得到很好的分离。 1.3.4 前处理 维生素C标准储备液；准确称取一定量维生素C用5g/L草酸溶液溶解维生素C容至50.00ml，其浓度为0.10mg/ml。当天配置，冰箱保存。临用时用5g/L草酸溶液稀释成不同的浓度的标准系列。 2 结果与讨论 2.1 线性范围和方法检出限制 取一定量的维生素C标准储备液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml用5g/L草酸稀释，配置成浓度分别为0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml、0.10mg/ml的标准系列。按操作步骤进行测定，标准曲线的相关系数为r=0.998-0.999。实验表明，本方法的线性范围宽，维生素C浓度在0.020-0.10mg/ml范围内都有较好的线性。以峰面积(Y)对浓度(x)回归，二者呈良好线性关系，回归方程：Y=2837861.25X+6637.41。r=0.9993。以3倍基线噪声所对应的浓度计算本方法的检出限维生素C的检出限为0.10ug。线性关系如表1所示 表1 样品维生素C的线性范围 序号 Vc质量（ug） 峰面积 1 0.11 147498 2 0.22 286068 3 0.33 436170 4 0.44 565614 5 0.55 714256 2.2 精密度实验 为考察进样精密度，精密吸取维生素C对照品5 ul注入高效液相色谱仪，重复进样5次，测定峰面积值如表2： 表2 维生素 C含量测定结果及精密度 序号 Vc质量（ug） 峰面积 RSD% 1 0.11 148157 2 0.11 14638 3 0.11 14825 1.8 4 0.11 147541 5 0.11 147955 根据平均值和标准差求得RSD为1.8%。 2.3 重现性考察 取刺梨粉（批号080201），分别制