2017届高三生物 实验专项突破31 DNA的粗提取与鉴定 新人教版 课件.pptVIP

2017届高三生物 实验专项突破31 DNA的粗提取与鉴定 新人教版 课件.ppt

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2017届高三生物 实验专项突破31 DNA的粗提取与鉴定 新人教版 课件

实验原理 1. DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同,其中在物质的量浓度为0.14 mol/L时最低。 2. DNA不溶于酒精,但是细胞中的一些有机物如蛋白质则溶于酒精,可以用酒精提纯。 3. DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色,可用来鉴定DNA分子。 实验流程 1. 做该实验时,不能用猪血代替鸡血,因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核,不能提取DNA。 2. 制备鸡血细胞液时,要注意向鸡血中加柠檬酸钠,防止血液凝固。 3. 涨破细胞的方法:向血细胞中加入蒸馏水,血细胞溶液的浓度大于蒸馏水的浓度,从而使血细胞大量吸水而涨破。不能用生理盐水,因为血细胞溶液的浓度与生理盐水的浓度相当,所以血细胞在生理盐水中不能吸收水分。 4. 两次加入蒸馏水,第一次是为了使血细胞吸水涨破;第二次是为了降低氯化钠的浓度,有利于DNA的析出。 5. 两次析出DNA的方法:第一次是加入蒸馏水,降低氯化钠的浓度,促使DNA析出;第二次是加入冷酒精,因为DNA不溶于酒精溶液。 6. 鉴定DNA时要用两支试管,其中不加DNA的试管起对照作用,该试管溶液不变色,另一支加有DNA的试管溶液变蓝色。 选材时注意选用细胞易破碎、DNA含量相对较高的生物组织;鉴定DNA的二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定效果。 [2010·江苏卷]某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动,具体步骤如下: 材料处理:称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份,每份10 g。剪碎后分成两组,一组置于20℃、另一组置于-20℃条件下保存24 h。 DNA粗提取: 第一步:将上述材料分别放入研钵中,各加入15 mL研磨液,充分研磨。用两层纱布过滤,取滤液备用。 第二步:先向6只小烧杯中分别注入10 mL滤液,再加入20 mL体积分数为95%的冷酒精溶液,然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌,使絮状物缠绕在玻璃棒上。 第三步:取6支试管,分别加入等量的2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮状物。 DNA检测:在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂,混合均匀后,置于沸水中加热5 min,待试管冷却后比较溶液的颜色深浅,结果如下表。 (注:“+”越多表示蓝色越深) 分析上述实验过程,回答下列问题: (1)该探究性实验的课题名称是________。 (2)第二步中“缓缓地”搅拌,这是为了减少________。 (3)根据实验结果,得出结论并分析。 ①结论1:与20℃相比,相同实验材料在-20℃条件下保存,DNA的提取量较多。 结论2:________。 ②针对结论1,请提出合理的解释:________。 (4)氯仿密度大于水,能使蛋白质变性沉淀,与水和DNA均不相溶,且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度,依据氯仿的特性,在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是: ________________________________________________________________________。 然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。 思路点拨:本题主要考查DNA粗提取的相关知识,意在考查考生的实验与探究能力。如果DNA断裂,就不容易被提取出来;温度主要是通过影响酶的活性来影响生理过程。粗提取得到的DNA中含有少量的蛋白质,可以通过氯仿的特殊功能来去除蛋白质,提高DNA纯度。 答案:(1)探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响 (2)DNA断裂 (3)①等质量的不同实验材料,在相同的保存温度下,从蒜黄提取的DNA量最多 ②低温抑制了相关酶的活性,DNA降解速度慢 (4)将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混合,静置一段时间,吸取上清液 * ++++ ++ +++ -20℃ +++ + ++ 20℃ 蒜黄 辣椒 花菜 材料保存温度 * *

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