丁香假单胞大豆致病变种harpin 编码基因的克隆 - 南京农业大学学报.pdf

摇 南京农业大学学报摇 2013,36(1):6-12 http:/ / 摇 Journal of NanjingAgricultural University doi:10.7685/ j.issn.1000-2030.2013.01.002 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試 张岩,伍辉军,周晓辉,等.丁香假单胞大豆致病变种harpin编码基因的克隆表达与功能研究[J].南京农业大学学报,2013,36(1):6-12 丁香假单胞大豆致病变种harpin编码基因的 克隆表达与功能研究 张岩,伍辉军,周晓辉,高学文* (南京农业大学植物保护学院/ 农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室,江苏 南京210095) 摘要:采用PCR方法从丁香假单胞大豆致病变种(Pseudomonas syringae pv.glycinea)A1和 S1菌株中分别克隆到大小为 1026和1038 bp 的hrpZ基因(hrpZ 和hrpZ ),对该基因进行了原核表达和功能研究。 SDS鄄PAGE显示其表达产物为 PsgA1 PsgS1 3 3 相对分子质量62伊10 的融合蛋白,harpinZ 和harpinZ 的相对分子质量约为35伊10 。 harpinZ 的粗提蛋白经GSTrap PsgA1 PsgS1 PsgS1 -1 FF纯化后质量浓度可达1.1mg·mL 。 生物活性检测表明,该蛋白对热稳定,对蛋白酶K敏感,可以在非寄主植物烟草上 激发过敏反应,过敏反应可以被真核生物代谢抑制剂抑制,并且对烟草有明显的促生作用。 序列比对发现,来自丁香假单 胞大豆致病变种的hrpZ基因可分为2类,一类以hrpZ 为代表,包括hrpZ ,另一类以hrpZ 为代表,包括来自r0 和 PsgA1 Psg12 PsgS1 Race4菌株的hrpZ基因。 这2类hrpZ基因的核苷酸同源性为79%,氨基酸同源性为77%,均富含甘氨酸,不含半胱氨酸, 与假单胞菌属以外的其他革兰氏阴性植物病原细菌harpin编码基因不存在相似性。 关键词:丁香假单胞大豆致病变种;harpin编码基因;GST融合表达;烟草;过敏性反应;促生 中图分类号:S432.42摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2013)01-0006-07 Cloning,expressing and function of a harpin鄄encoding gene from Pseudomonas syringae pv.glycinea ZHANG Yan,WU Huijun,ZHOU Xiaohui,GAO Xuewen* (College of Plant Protection/ Key Laboratory of Integr