pick1蛋白83位点氨基酸对pdz结构域的影响 - 浙江大学学报.pdf

第４１卷　第２期 浙 江 大 学 学报 （医学 版 ） Ｖｏｌ４１　Ｎｏ２ 　 ２０１２年 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＺＨＥＪＩＡＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥＳ） 　 ２０１２ ｈｔｔｐ： ｗｗｗ．ｊｏｕｒｎａｌｓ．ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ／ｍｅｄ ＤＯＩ：１０．３７８５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００８９２９２．２０１２．０２．００５ ∥ ＰＩＣＫ１蛋白８３位点氨基酸对 ＰＤＺ结构域的影响 冯　永，乔　木，卢宇婷，蒋亚建，王　娜，朱丽君 （浙江大学医学院神经科学研究所，浙江杭州３１００５８） ［摘　要］　目的：研究ＰＩＣＫ１（ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｗｉｔｈＣｋｉｎａｓｅ１）蛋白ＰＤＺ结构域内８３位点赖氨酸 （Ｋ８３）对ＰＩＣＫ１和ＡＭＰＡ受体ＧｌｕＲ２亚单位相互作用的影响。方法：利用计算机对ＰＩＣＫ１ＰＤＺ结 构域和ＧｌｕＲ２Ｃ末端４个氨基酸残基进行对接模拟，然后将Ｋ８３进行虚拟点突变，计算并观察突变 后结构和键能的改变。利用实验室已有的野生型全长ＰＩＣＫ１ｃＤＮＡ质粒为模板，构建点突变质粒， 与野生型ＧｌｕＲ２共转到ＨＥＫ２９３Ｔ细胞，观察两者在细胞内定位和分布的改变。结果：当野生型 ＰＩＣＫ１与ＧｌｕＲ２共转染时，ＨＥＫ２９３Ｔ细胞有大量ＰＩＣＫ１和ＧｌｕＲ２共定位的集簇（ｃｌｕｓｔｅｒ）。当我们 把构建的ＰＩＣＫ１突变体与ＧｌｕＲ２共转染时，不同的突变体表现出不一样的改变。结论：改变Ｋ８３ 位点的氨基酸结构，很可能会改变ＰＩＣＫ１ＰＤＺ结构域与ＧｌｕＲ２Ｃ末端结合所形成的疏水、氢键、静 电相互作用，使得ＰＤＺ结构域与ＧｌｕＲ２Ｃ末端的结合能力发生不同程度的改变。 ［关键词］　蛋白激酶Ｃ；蛋白质构象；蛋白质类／化学；受体，谷氨酸／代谢；计算机模拟；ＰＩＣＫ１； ＰＤＺ结构域；ＧｌｕＲ２亚基；定点突变 ［中图分类号］　Ｑ１８９　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１００８９２９２（２０１２）０２０１５３０６ Ｋ８３ｓｉｔｅａｆｆｅｃｔｓＰＩＣＫ１ＰＤＺｂｉｎｄｉｎｇａｂｉｌｉｔｙ ＦＥＮＧＹｏｎｇ，ＱＩＡＯＭｕ，ＬＵＹｕｔｉｎｇ，ＪＩＡＮＧＹａｊｉａｎ，ＷＡＮＧＮａ，ＺＨＵＬｉｊｕｎ（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ， ＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５８，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆ８３ｓｉｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｏｆＧｌｕＲ２ＣｔｅｒｍｉｎａｌａｎｄＰＩＣＫ１ ＰＤＺｄｏｍａｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＤｏｃｋｉｎｇｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＰＩＣＫ１ＰＤＺｄｏｍａｉｎｗｉｔｈＧｌｕＲ２ＣｔｅｒｍｉｎａｌＰＤＺｂｉｎｄｉｎｇ ｍｏｔｉｆｗａｓｂｕｉｌｔｗｉｔｈｃｏｍｐｕｔｅｒｓｏｆｔｗａｒｅ．ＡｆｔｅｒＫ８３ｓｉｔｅｗａｓｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄｂｙｏｔｈｅｒａｍｉｎｏａｃｉｄ，ｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄｂｉｎｄｉｎｇｅｎｅｒｇｙｗｅｒｅｒｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄ；ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｓｉｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃｍｕｔａｎｔｓｗｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｕｓｉｎｇｗｉｌｄｔｙｐｅ ｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡａｓｔｅｍｐｌａｔｅ．ＭｕｔａｎｔｓｗｅｒｅｃｏｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｗｉｔｈＧｌｕＲ２ｉｎｔｏＨＥＫ２９３Ｔｃｅｌｌｓ．Ａｆｔｅｒ ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＰＩＣＫ１ａｎｄＧｌｕＲ２ｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｎｄｅｒｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｗｉｌｄ ｔｙｐｅＰＩＣＫ１ａｎｄＧｌｕＲ２ｆｏｒｍｅｄｍａｎｙｃｏｃｌｕｓｔｅｒｓｉｎＨＥＫ２９３Ｔｃｅｌｌｓａｓｒｅｐｏｒｔｅｄｂｙｏｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｇｒｏｕｐｓ； ｂｕｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔＫ８３ｍｕｔａｎｔｈａｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｉｎＨＥＫ２９３Ｔｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：ＴｈｅＫ８３ｓｉｔｅｉｎＰＤＺ ｄｏｍａｉｎｏｆＰＩＣＫ１ｉｓｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｏｒｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＰＩＣＫ１ａｎｄＧｌｕＲ２．Ａｌｔｅｒｉｎｇｌｙｓｉｎｅｗｉｌｌｐｒｏｂａｂｌｙ ｃｈａｎｇｅｔｈｅｈｙｄｒｏｐｈｏｂｉｃｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，