肉原肌凝蛋白之热安定性探讨 - 国立台南大学环境与生态学院.pdf

國立臺南大學 39 「環境與生態學報」第4 卷第 2 期（民國 100 年）：39-51 大彈塗魚(Boleophthalmus pectinirostris )肌 肉原肌凝蛋白之熱安定性探討 ∗ 黃銘志 國立台南大學環境生態學院/生物科技學系 摘要 大彈塗魚(Periophthalmini boleophthalmus) 是一種台灣西海岸濕地常見的濕地魚 類。能適應半水半陸的潮間帶環境。這種魚類棲息於河口水域、沼澤及泥灘，在泥下建 造垂直地道構成的洞內居住。由於大彈塗魚的生態特殊，濕地環境之溶氧、溫度、鹽度 變化劇烈，大彈塗魚如何適應溼地環境乃至於如何運動彈跳，肌肉結構及組成是重要關 鍵。 本次研究以肌肉纖維中保守性較高之肌肉纖維-原肌凝蛋白(TM)為研究對象，探討 大彈塗魚肌肉纖維 TM 的熱安定性為主，並與其他魚種做分析比較。研究方法如下：利 用超高速離心、等電點沉澱、硫銨分化及離子交換樹脂等方式找出精製大彈塗魚TM 蛋 白質的條件，經由一次電泳確認蛋白質純化後再用二次電泳分析有無 isoform 存在，經 示差掃描熱量分析儀分析(DSC)及圓二光偏極光譜儀分析(CD)與其他魚種做比較。 研究與分析結果顯示，大彈塗魚肌肉纖維中 TM 以一種型態出現，沒有 isoform ， 蛋白質結構以α-helix 為主，熔點 Tm 為 44℃。熱穩定性較黑鮪(Thunnus thynnus)及阿拉 斯加鱈魚(Theragra chalcogramma)安定的現象。希望這些研究能夠更幫助了解濕地生物 在濕地環境及生理適應之模式，了解生物多樣性及在演化上之意義。 關鍵字：大彈塗魚、原肌凝蛋白、示差掃描熱量分析儀(DSC)、圓二光偏 極光譜儀(CD) ∗ 通訊作者: mingchih39@.tw 40 環境與生態學報 壹、前言 生物的生理結構與環境適應息息相關，生物為了適應環境而演化出特有生理機制， 在一些環境變化大的地區如河口溼地或潮間帶，當漲潮時生物可能在海水環境中，退潮 時又以河水中生存，鹽度、溶氧、溫度的變化是這些生物必須去面對的問題，彈塗魚即 是其中的一種生活在環境變動劇烈中的生物。 我們常可看到彈塗魚快速移動，無論是在水中或是潮濕陸地，在溼地快速移動之魚 類，肌肉收縮能力與結構可能異於其他魚類。為了瞭解彈塗魚肌肉之結構，針對較易分 析之肌肉纖維-原肌凝蛋白作一探討。 原肌凝蛋白(tropomyosin, TM)是一種肌肉纖維蛋白，形狀為線狀以α-helix 結構為 主，兩股單體形成coiled-coil 結構，TM 單體之蛋白質分子量約為33 kDa 。在生理上， TM 可與鈣離子結合進而影響actin, myosin 等引起肌肉收縮(Perry, 2001) ，目前已知TM 是一種保守性相當高的肌肉纖維蛋白質，從低等動物到高等動物肌肉中均存在 (Hitchcock-Degregori and Varnell, 1990) 。TM 基本上可以分成兩大家族：一種為高分子 量(high molecular weight, HMW) TM ，胺基酸數以281-284 為主，及低分子量(low molecular weight) TM ，胺基酸數則以245-251 為主，其中在肌肉中的TM 蛋白主要以284 個胺基酸殘基為主。在哺乳動物已經發現了至少四種以上之isoform ，分別是α-,β-,TM-4, and hTMnm (Lees-Miller and Helfman, 1991; Perry, 2001) 。在TM 蛋白中，兩端前後約12 個胺基酸具高度保守性之N 端與 C