k33 位乙酰化修饰sumo 蛋白的化学合成 - chemical journal of .pdf

Ｖｏｌ．３７ 高等 学校 化 学 学报 Ｎｏ．１１ ２０１６年１１月 　 　 　 　 　 　 ＣＨＥＭＩＣＡＬＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩＮＥＳＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＩＥＳ　 　 　 　 　 　 １９８７～１９９２ ｄｏｉ：１０．７５０３／ ｃｊｃ Ｋ３３位乙酰化修饰ＳＵＭＯ蛋白的 化学合成 １ １ ２ １ 王业海 ，孔一夫 ，陈晨晨 ，李宜明 （１． 合肥工业大学生物与医学工程学院，合肥 ２３０００９； ２． 中国科学院强磁场科学中心，合肥 ２３００３１） 摘要　 采用高温辅助固相合成技术及基于多肽酰肼的自然化学连接技术，高效获得了小泛素相关修饰物 （ＳＵＭＯ）蛋白及３３位赖氨酸（Ｋ３３）乙酰化ＳＵＭＯ蛋白． 聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ）和圆二色光谱分析 结果表明，与生物表达蛋白相比，化学合成蛋白具有较好的纯度和类似的二级结构． 关键词　 小泛素相关修饰物；乙酰化；高温辅助固相合成；多肽酰肼； 自然化学连接 中图分类号　 Ｏ６２９　 　 　 　 文献标志码　 Ａ　 　 　 　 在真核细胞中小泛素相关修饰物（ＳＵＭＯ）修饰已经成为调控蛋白质功能的一种关键翻译后修 ［１～６］ ［７～９］ 饰 ． 研究发现，数以百计的蛋白可以被 ＳＵＭＯ 化 ，ＳＵＭＯ 化蛋白进而参与到染色质的组装、 ＤＮＡ 的修复、 蛋白质的体内平衡和信号转导等生理过程中［１０，１１］． 与蛋白质泛素化类似，蛋白质的 ［１２］ ＳＵＭＯ化同样需要Ｅ１激活酶、Ｅ２结合酶和Ｅ３连接酶等３种酶的参与 ． 这３种酶的协同作用使底物 蛋白ＳＵＭＯ化，而底物蛋白的ＳＵＭＯ化位点主要发生在一段收敛的ΨＫｘＤ／ Ｅ（Ψ代表疏水性氨基酸； ［１３］ ｘ代表任意氨基酸）序列的赖氨酸上 ． ＳＵＭＯ化蛋白的识别主要是通过ＳＵＭＯ与其效应蛋白上ＳＵＭＯ相互作用基序（ＳＩＭ域）的非共价相 互作用来实现［１４～１６］． ＳＩＭ是一段少于１０个氨基酸的多肽序列，包含 １个以３～４个氨基酸为核心的疏 ［１７］ 水序列（主要是Ｖａｌ或者Ｉｌｅ）和１个邻近的酸性区域 ． ＳＩＭ 中的疏水残基会结合ＳＵＭＯ结构中的β ２ 股，并且会使β 折叠延伸． ＳＩＭ 中的酸性残基通过结合 ＳＵＭＯ蛋白表面上的酸性区域来增加 ＳＩＭ 与 ＳＵＭＯ蛋白的结合力． ＳＵＭＯ化蛋白与效应蛋白ＳＩＭ 域的正确识别是 ＳＵＭＯ化蛋白发挥正常功能的 关键． ＳＩＭ 中的一些Ｓｅｒ或Ｔｈｒ可以被磷酸化，磷酸化后的ＳＩＭ则可通过电荷相互作用增强其与ＳＵＭＯ 化蛋白的结合力［１８～２０］ ；ＳＵＭＯ蛋白可以被乙酰化，乙酰化后的ＳＵＭＯ蛋白与ＳＩＭ 的结合力则大幅度降 ［２１］ 低 ． ＳＵＭＯ蛋白与 ＳＩＭ 之间的这种精细化调控是 ＳＵＭＯ 化蛋白相关功能得以正常发挥的重要 保证．　 　 　 与磷酸化ＳＩＭ 的制备相比，制备大量、性质均一的乙酰化ＳＵＭＯ则要困难得多． 目前，制备乙酰化 ＳＵＭＯ蛋白的主要方法为通过非天然氨基酸定点嵌入方法将乙酰化Ｌｙｓ嵌入到ＳＵＭＯ蛋白中，或通过 ［２２］ 酶促反应，体外获得乙酰化ＳＵＭＯ蛋白 ． 这２种方法都难以获得大量的乙酰化ＳＵＭＯ蛋白． 近年来， 由于多肽固相合成及片段连接技术的发展，使得蛋白质化学合成成为一种高效获得翻译后修饰蛋白的 ［２３～３４］