sars 蛋白酶的抑制与抗病毒药物研发.pdf

週報 第1053期 知識天地 SARS 蛋白酶的抑制與抗病毒藥物研發 梁博煌（生化所副研究員） 病毒的研究在台灣雖有相當的基礎，但其研究的方向較偏重於臨床案例、病毒的流行病學及病理的分子機制 等，較少著重化學生物學（Chemical Biology ）層面的藥物合成與測試，以致病毒疾病的用藥仍由大藥廠開發， 並取得專利權行銷全世界。事實上，藥物的開發在技術層面並非全由藥廠掌握，學術界發展出來的獨特技術亦相 當關鍵，因此在先進國家常有學術界的教授，因獲得有利用價值的發現，而自行開創新公司。但是藥物的研發需 要龐大資金，失敗率高，恐怕只有藥廠才有辦法完成最後藥物的開發，故學術界的發現最後均可能被藥廠收購。 當然如能因此藥物而救人，也是功不可沒。總而言之，由學界來當火車頭推動藥物研發，是很合理且值得，無怪 乎每年都有許多和藥物研發相關的國際研討會，顯示學術界及工業界對於藥物研發相關資訊的渴望。 有關藥物研發的科學期刊也愈來愈多，最著名的《Nature 》有《Nature Biotechnology 》、《Nature Medicine 》及 《Nature Review Drug Discovery 》外，最近也出刊《Nature Chemical Biology 》刊載關於化合物可影響生命現象的 報告。Chemical Biology 是用化學的方法來研究生命現象，範疇包括生物有機化學、生物無機化學、生物分析化 學及生物物理化學等生物化學，有別於細胞生物學、發育生物學、分子生物學等生物學。事實上，生物學及化學 在藥物研發上是同等重要，也需先有對疾病分子機制的瞭解，例如發現產生突變的基因，使得表現的蛋白活性和 正常不同，才能對症找藥，以Chemical Biology 的方法發現藥物，最後測試藥物的活性。而在使用化學的方法來 研究藥物時，所需要的技術為針對疾病相關酵素之活性及反應機制作研究，以發展出測試活性的方法，並依此篩 選化合物庫來取得候選藥物。另一方式是利用解析酵素三級結構，接著以結構為基礎來設計藥物；以電腦軟體為 輔，設計並合成酵素抑制劑，並在體外或細胞內測試其效能，這時可以再將抑制劑和酵素共結晶，依其結構修飾 抑制劑結構，以便合成更佳候選藥物。候選藥物在通過動物活體及人體的測試後，才能尋求政府藥物管理機關的 認證而成為藥品。 以SARS 藥物研發為例， SARS 於2002 年底在中國大陸廣東省發生，2003 年傳播到全球20 幾個國家，造 成8 千多個病例，約8 百人死亡。台灣也因有人受感染而造成人心惶惶，政府也啟動緊急應變措施，由國科會撥 專款研究SARS ；由本院賴明詔副院長及台大陳定信院長擔任總指揮，組成國內各個實驗室之團隊，在對抗SARS 的各個層面上努力。藥物研發也在本院基因體中心翁啟惠主任的召集下，由該中心、化學所及生化所一些具 Chemical Biology 研究專長的實驗室組成研究團隊，本實驗室也為其中一員，參加以SARS 蛋白酶為目標的藥物 研發。蛋白酶酵素在SARS 病毒複製過程中，扮演非常重要的角色，其功能為在病毒侵入人體後，生成多胜肽上 切割 11 個定點而使一些重要酵素變成有活性的成熟酵素。這些酵素包括蛋白酶本身、helicase 、RdRp （RNA-dependent RNA polymerase ）及一些未知功能的蛋白。而RdRp 對於稍後病毒RNA 的複製，最後產生病毒 外部結構蛋白很重要，所以蛋白酶對於整體病毒複製為必要的催化，若能發現其抑制物，可能可發展成為殺死病 毒的藥物。 根據其它類似的3C 蛋白酶研究，SARS 蛋白酶為一類似chymotrpsin 的蛋白酶 ，但不同於chymotrpsin 使用 Ser 、His 、Asp 三個重要氨基酸，SARS 蛋白酶使用Cys 、His 催化水解反應，因此病毒也稱為3C-like （3CL ）蛋 白酶 。因為SARS 病毒還有另一個蛋白酶稱為 papain-like 蛋白酶 ，所以3CL 蛋白酶又稱主要蛋白酶（main protease ）。我們首先用大腸桿菌來表達此SARS 的主要蛋白酶 ，並設計螢光胜肽基質，將胜肽兩端接上螢光團， 一端是發出螢光的Edans ，一端是吸收螢光的